猪链球菌2型MRP和EF双基因共表达重组腺病毒载体的构建

• 作者: 余辉 周小鸥 李兴暖 梅钧 汪涛 赵志军
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 猪链球菌2型 溶菌酶释放蛋白 胞外因子 双基因共表达 重组腺病毒载体
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 130-134
• 语种: 中文

摘要

旨在构建猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白(MRP)和胞外因子(EF)双基因共表达重组腺病毒载体.根据猪链球菌2型MRP和EF的基因序列设计合成2对引物,以猪链球菌2型基因组为模板,扩增MRP基因(第1 801-2 513位)和EF基因(第1 783-2 563位)序列,并克隆到pMD18-T载体.然后将MRP基因、IRES元件和EF基因依次定向克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中构建重组穿梭质粒pShuttle-CMV-MRP-IRES-EF,再经PmeⅠ酶切,然后转化至含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183-AD-1感受态细胞中,经同源重组获得重组腺病毒载体质粒rAdeno-CMV-MRP-IRES-EF.PacⅠ酶切线性化该重组腺病毒载体质粒,再转染AD-293细胞进行病毒包装,最后对细胞包装的病毒液进行PCR鉴定.结果表明,克隆的MRP和EF基因测序正确,酶切重组穿梭质粒和腺病毒载体质粒得到特异酶切产物;线性化的重组腺病毒载体质粒rAdeno-CMV-MRP-IRES-EF转染AD-293细胞6d后也出现明显的细胞病变(CPE),在培养细胞的上清病毒液中也检测到了MRP和EF基因片段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余辉	九江学院基础医学院病原生物学教研室	15	31	3.0	4.0
2	梅钧	九江学院基础医学院病原生物学教研室	11	36	4.0	5.0
3	赵志军	宁夏医科大学总医院医学实验中心	66	264	9.0	12.0
4	汪涛	九江学院基础医学院病原生物学教研室	9	29	4.0	5.0
8	李兴暖		2	6	2.0	2.0
9	周小鸥		1	4	1.0	1.0