miR-34a稳定表达株构建及其对宫颈癌Caski细胞功能影响的观察

• 作者: 佐满珍 刘朝奇 查锦芬 汤文凡 汤超
• 来源期刊: 中华肿瘤防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 宫颈肿瘤 微小RNAs miR-34a 表达载体 基因表达 细胞周期 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2013,（19）
• 所属期刊栏目: 实验研究/论著
• 页码范围: 1503-1507
• 分类号: R737.33
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-5269.2013.19.012

摘要

目的:构建人miR-34a的真核表达载体,并研究其对宫颈癌细胞株Caski细胞活性的影响.方法:以人正常组织基因组DNA为模板,用PCR法扩增得到miR-34a的前体序列,构建miR-34a真核表达载体pEGFP-C1-miR34a.同时用重组载体pEGFP-C1-miR34a转染宫颈癌细胞株Caski细胞,筛选miR-34a稳定表达细胞系作为实验组,pEGFP-C1转染组为对照组(Control),用RT-PCR及Real time RT-RCR法鉴定miR-34a在克隆细胞中的表达,并用MTT、FCM分析miR-34a的生物学特性,RT-PCR研究检测其靶基因表达改变.结果:成功构建了人miR-34a真核表达载体pEGFP-C1-miR34a,并在宫颈癌Caski细胞中上调miR-34a的表达,实验组miR-34a的表达相对于对照组升高约3.13倍；MTT提示,实验组miR 34a能够显著的抑制Caski细胞增殖,差异有统计学意义,P=0.018;实验组G0/G1期百分率为77.7％,与对照组的50％比较,差异有统计学意义,P=0.004;而实验组S期百分率为20.3％,对照组为35.4％,两组比较差异有统计学意义,P=0.027；实验组细胞miR-34a靶基因细胞周期基因CDK4、CDK6、Cyclin E2和E2F1 mRNA的表达下调,与对照组比较差异有统计学意义,P=0.002.结论:成功构建人miR-34a的真核表达载体,并能显著抑制宫颈癌细胞株Caski细胞活性,为进一步研究miR-34a在宫颈癌中的功能及基因调控机制奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘朝奇	三峡大学医学院	171	552	10.0	15.0
2	佐满珍	三峡大学人民医院妇产科	29	132	6.0	10.0
3	查锦芬	三峡大学人民医院妇产科	8	18	2.0	4.0
4	汤文凡	三峡大学人民医院妇产科	7	40	3.0	6.0
5	汤超	三峡大学医学院	3	11	2.0	3.0