肠致病性大肠埃希菌EspB基因的体外诱导表达研究

• 作者: 余治健 刘晓军 李多云 潘伟光 邓启文 郑金鑫 陈重 马桂红
• 来源期刊: 深圳中西医结合杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肠致病性大肠埃希菌 EspB基因 重组质粒 蛋白诱导表达 蛋白质印迹试验
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 实验论著
• 页码范围: 193-196
• 分类号: R378.2+1
• 语种: 中文

摘要

目的:研究肠致病性大肠埃希菌(enteropathogenic E.coli,EPEC) EspB基因的体外诱导表达情况,获得纯化的EspB蛋白.方法:体外构建重组质粒pET-28a-EspB,转化BL21感受态细菌培养,提取重组质粒并行琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定.重组质粒pET-28a-EspB经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹试验(Western blot)分析.pET-28a-EspB表达产物再次经纯化,获得的纯化蛋白进一步经SDS-PAGE和蛋白质Westernblotting分析验证.结果:经双酶切和测序验证pET-28a-EspB重组质粒构建成功.pET-28a-EspB重组质粒经IPTG诱导后,在诱导表达不同时间点,培养菌液、沉淀和上清中均有良好的蛋白表达.经SDS-PAGE和蛋白质Western blotting分析验证我们获得了纯化的EspB蛋白.结论:体外可成功诱导EPEC EspB蛋白稳定高效表达并获得纯化EspB蛋白产物.