重组人IL-1Ra与TGF-β1联合基因体外转染兔膝关节软骨细胞的研究

• 作者: 刘君 卫小春 向川 孙剑 李璐 林有志
• 来源期刊: 中国骨与关节外科
• 关键词: 软骨细胞 基因转染 IL-1Ra TGF-β1
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 50-55
• 页数: 6页
• 字数: 5897字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-1439.2013.02-013

摘要

背景:多基因联合转染具有增强功能基因协同效应、消除短板差异等作用,因而目前被受到广泛重视.目的:观察以逆转录病毒(RV)为载体,介导白介素-1受体拮抗蛋白(IL-1Ra)基因单独转染及其与转化生长因子-β1(TGF-β1)基因共同转染兔膝软骨细胞后的表达,及对其增殖代谢的影响.方法:构建逆转录病毒载体PLNCX-IL-1Ra-GFP与PLNCX2-TGF-β1-RFP,将其转染至包装细胞PT67,待形成阳性克隆后扩增培养,收集病毒上清,并计算病毒上清滴度.将体外培养的软骨细胞分为空白转染组、PLNCX2空载体转染组、IL-1Ra单基因转染组及IL-1Ra+ TGF-β1双基因转染组.酶联免疫吸附分析法(ELISA)进行瞬时基因表达(细胞转染后48h)及稳定基因表达(筛选后4周)的检测；免疫组织化学染色法检测各组IL-1Ra、TGF-β1及Ⅱ型胶原的表达；流式细胞仪检测各组细胞生长周期比例.结果:PLNCX2-IL-1Ra-GFP与PL NCX2-TGF-β1-RFP转染包装细胞后分别有绿色荧光与红色荧光表达；空白组与PLNCX2空载体转染组的上述指标无统计学差异(P＞0.05)；ELISA检测示基因转染组有明显基因表达；与空白组及PLNCX2空载体转染组相比,双基因转染组IL-1Ra、TGF-β1、Ⅱ型胶原含量明显提高,IL-1Ra基因转染组IL-1Ra含量提高明显,但TGF-β1、Ⅱ型胶原含量提高不明显；双基因转染组软骨细胞位于S期的比例明显增高,与其他组比较有统计学差异(P＜0.05).结论:逆转录病毒载体构建成功,基因转染软骨细胞后可获得稳定表达,双基因转染的软骨细胞生物学活性优于单基因转染,为基因治疗骨关节炎(OA)的研究提供实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卫小春	山西医科大学第二医院骨科骨与软组织损伤修复山西省重点实验室	256	1901	21.0	31.0
2	向川	山西医科大学第二医院骨科骨与软组织损伤修复山西省重点实验室	60	354	9.0	16.0
3	刘君	山西医科大学第二医院骨科骨与软组织损伤修复山西省重点实验室	5	7	2.0	2.0
4	李璐	山西医科大学第二医院骨科骨与软组织损伤修复山西省重点实验室	12	30	3.0	5.0
5	林有志	山西医科大学第二医院骨科骨与软组织损伤修复山西省重点实验室	1	5	1.0	1.0