猪CD151转基因PK-15细胞系构建及其对猪繁殖与呼吸综合征病毒的易感性

• 作者: 夏晓莉 孙怀昌 张鑫宇 张钰 郭睿 黄燕燕
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪CD151 转基因细胞系 猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 侵染和免疫
• 页码范围: 507-514
• 分类号: S852
• 语种: 中文

摘要

[目的]建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)易感的猪CD151转基因PK-15细胞系,研究CD151分子在PRRSV感染猪源细胞中的作用.[方法]用RT-PCR从猪肺泡巨噬细胞中扩增CD151全长cDNA,测序正确后克隆人真核表达载体pcDNA3;用重组载体pcDNA-CD151转染PK-15细胞,经G418抗性筛选获得转基因细胞系PK15-CD151,用RT-PCR和免疫荧光试验检测CD151表达；用VR-2332株PRRSV分别感染PK-15细胞、PK15-CD151细胞、MARC-145细胞和3D4-CD163细胞,定期观察细胞病变,用RT-PCR和免疫荧光试验检测病毒RNA基因组和病毒抗原,用半数组织细胞感染剂量测定病毒滴度.[结果]从猪巨噬细胞中克隆得序列正确的猪CD151 cDNA;从重组载体转染的PK-15细胞培养中筛选得G418抗性细胞克隆,并能正确表达猪CD151分子；在PRRSV感染后,PK15-CD151细胞虽然不表现明显的细胞病变,但能检测到病毒RNA基因组和病毒抗原,并能产生较高滴度的感染性病毒；该细胞系已在体外传30代以上,第10、20、30代细胞的PRRSV滴度无明显变化.[结论]猪CD151基因转染能使非易感PK-15细胞获得对PRRSV的易感性,提示猪CD151参与PRRSV感染猪源细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙怀昌	扬州大学兽医学院	138	1042	15.0	25.0
2	张钰	扬州大学兽医学院	23	59	5.0	6.0
3	张鑫宇	扬州大学兽医学院	40	142	6.0	10.0
4	夏晓莉	扬州大学兽医学院	24	78	6.0	8.0
5	黄燕燕	扬州大学兽医学院	2	10	2.0	2.0
6	郭睿	扬州大学兽医学院	4	8	2.0	2.0