单管一步甲基化可变位点分析技术

• 作者: 奠耀南 岳阳阳 张倩 翟仙敦 赵贵森 鲁涤
• 来源期刊: 法医学杂志
• 学科: 政治法律
• 关键词: 法医遗传学 DNA甲基化 链融解曲线 甲基化敏感性限制酶 甲基化可变位点
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 419-424
• 页数: 6页
• 分类号: DF795.2
• 字数: 4785字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-5619.2013.06.005

摘要

目的 建立单管一步甲基化可变位点(methylation variable position,MVP)分析技术——单管消化后PCR链融解曲线分析(post-digestion PCR-melting curve analysis,PDP-MCA). 方法 以文献报道的差异甲基化区(differentially methylated region,DMR)为模型,在MVP两侧设计一组解链温度各不相同的引物.应用FastDigest甲基化敏感性限制酶(methylation-sensitive restriction enzyme,MSRE),在同一反应管内顺次进行DNA的酶切、复合扩增和MCA检测,生成MCA图谱.同时用该方法和传统的MSRE-PCR MCA技术检测相同样品(外周静脉血、精液、阴道液各5份),比较两种方法检测结果,验证其可行性,并分析比较不同样品的MCA/HRM图谱.结果 解链温度相差2℃以上的片段,MCA峰分离良好,复合扩增后可以用MCA技术检测.应用单管PDP-MCA技术,可以集酶切、扩增和检测三步于一管,在2h内得到与传统方法一致的特异性图谱和数据,并实现样品的快速分类鉴别. 结论 单管PDP-MCA技术可以实现多个MVP的单管、闭管检测,具有简便、快速、易于自动化等优点,可用于样品DNA甲基化差异的检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	鲁涤	中国政法大学证据科学教育部重点实验室	15	75	4.0	8.0
2	翟仙敦	河南科技大学法医学院	47	150	7.0	11.0
3	张倩	河南科技大学法医学院	16	81	3.0	9.0
4	岳阳阳	河南科技大学法医学院	2	2	1.0	1.0
8	赵贵森	河南科技大学法医学院	16	35	3.0	5.0
12	奠耀南	河南科技大学法医学院	1	0	0.0	0.0