RNA干扰环氧化酶-2抑制人表皮样喉癌细胞系增殖和侵袭的研究

• 作者: 姚小宝 张少强 王晓侠
• 来源期刊: 华西医学
• 关键词: 喉癌 环氧化酶-2基因 慢病毒 基因沉默
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 195-199
• 页数: 5页
• 语种: 中文
• DOI: 10.7507/1002-0179.20130063

摘要

目的 构建沉默环氧化酶-2 (COX-2)基因重组慢病毒,观察其体外侵袭的抑制作用,从而探讨干扰COX-2抑制喉癌细胞增殖的作用机理,为喉癌的治疗提供新的思路.方法 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测COX-2基因在人表皮样喉癌细胞(Hep-2)中的表达情况.利用上海吉凯公司RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体系统,构建针对COX-2基因慢病毒RNAi表达载体.转染Hep-2细胞,干扰COX-2基因的表达,实时定量PCR检测干扰前后基因表达变化.利用生长曲线测定干扰载体转染前后细胞生长速度变化.流式细胞仪检测细胞的生长周期.Boyden侵袭小室法测定体外侵袭力.结果 成功构建了COX-2慢病毒RNAi表达载体,并建立了干扰COX-2基因的Hep-2细胞系.实时定量PCR检测COX-2基因在Hep-2细胞系中过表达被显著抑制.生长曲线测定,COX-2基因干扰后细胞增殖明显变慢.流式细胞仪检测细胞的生长周期可见干扰组诱导Hep-2细胞凋亡,转染G0～G1期细胞数量明显上升,S期细胞减少,表明siRNA干扰Hep-2细胞后,细胞由G0～G1期进入到S期受到阻滞,细胞增殖速度下降.体外侵袭实验中,Hep-2-AS侵袭细胞数(31.0±1.8)显著低于Hep-2细胞(104.0±2.6)及Hep-2-P细胞(99.0±2.7),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 喉癌中过表达的COX-2基因被干扰后表达明显降低并显著抑制细胞的生长速度和侵袭能力.同时验证了COX-2基因RNA干扰在进行抗肿瘤的治疗中潜在的应用前景.