大鼠胰岛分离纯化新方法“两步过筛法”的建立及评估

• 作者: 支涤静 沈水仙 罗飞宏 陆忠
• 来源期刊: 中国当代儿科杂志
• 关键词: 胰岛 分离 纯化 滤网 大鼠
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 论著·实验研究
• 页码范围: 572-576
• 语种: 中文
• DOI: 10.7499/j.issn.1008-8830.2013.07.016

摘要

目的 建立胆管内灌注胶原酶分离胰岛与适宜孔径滤网过筛相结合的快速纯化胰岛细胞的方法并评估这种方法的效果.方法 清洁级8～12周龄Sprague-Dawley大鼠胆总管内灌注胶原酶消化、分离胰岛,分别采用Ficoll不连续密度梯度离心法和两次经不同孔径滤网过滤的两步过筛法纯化胰岛细胞,行双硫腙(dithizone,DTZ)染色、吖啶橙/碘丙啶(acridine orange/propidium iodide,AO/PI)双色荧光染色法分析分离胰岛的纯度与活率;行葡萄糖刺激—胰岛素释放试验检测细胞活性;采用免疫组化荧光染色法观察胰岛细胞胰岛素的合成功能.结果 大鼠两步过筛法和胰岛密度梯度离心法胰岛细胞收获量分别782±115胰岛当量(IEQ)和598±135 IEQ,差异有统计学意义(P＜0.01);纯度分别为90％～100％和65％～ 85％,活率分别为＞95％和85％ ～95％.两步过筛法分离的胰岛葡萄糖刺激—胰岛素释放试验显示培养24 h后,高糖实验组胰岛素浓度(76.9±6.1 μg/L)显著高于刚分离纯化后即加入高糖刺激时的浓度(49.4±3.9 μg/L),差异有统计学意义(P＜0.01).结论 两步过筛法分离纯化大鼠胰岛可获得纯度高、活率高且活性好的大鼠胰岛细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗飞宏	复旦大学附属儿科医院内分泌遗传代谢病科	81	446	10.0	18.0
2	沈水仙	复旦大学附属儿科医院内分泌遗传代谢病科	44	365	11.0	18.0
3	支涤静	复旦大学附属儿科医院内分泌遗传代谢病科	18	230	8.0	15.0
4	陆忠	复旦大学附属儿科医院内分泌遗传代谢病科	9	146	4.0	9.0