放线菌素D诱导非洲绿猴肾细胞(Vero)凋亡模型的建立

• 作者: 吕芳彪 杨慧兰 樊建勇 钟菲菲
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: 非洲绿猴肾细胞 细胞凋亡 ActD
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 842-847
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.11844/cjcb.2013.06.0007

摘要

用不同剂量(0,0.25,0.5,1.0,2.0,4.0 mg/L)的放线菌素D(actinomycin D,ActD)诱导Vero细胞凋亡不同时间(0,12,24,36,48,60 h). MTT法和流式细胞术的结果显示,以未处理的细胞作为对照组,各剂量ActD处理Vero细胞不同时间后,细胞的活力均下降,凋亡率均升高,且呈剂量和时间依赖效应.当ActD浓度为1 mg/L、作用时间为36 h,细胞的存活率为(0.55±0.01),凋亡率为(34.83±1.13)％. Gimesa染色、Hoechst33258染色表明,经ActD(1 mg/L)诱导36 h后Vero细胞形态学发生明显改变,出现膜小泡和凋亡小体形成等凋亡细胞特征；Real-time PCR结果显示,诱导组Bax/Bcl-2 mRNA相对含量明显大于正常对照组,且差异有统计学意义；分光光度法结果表明,与正常对照组相比较,凋亡诱导组caspase-3和caspase-8活性明显升高且差异具有统计学意义,caspase-9活性与对照组相比较,差异无统计学意义.用1 mg/L ActD诱导Vero细胞36h时,细胞存活率和凋亡率都很高,可作为ActD诱导Vero细胞的最佳剂量.在该剂量及作用时间下,caspase-3和caspase-8活性明显升高,表明ActD诱导Vero细胞凋亡是通过caspase-8相关的途径.该实验成功建立了ActD诱导非洲绿猴肾细胞凋亡模型,将有助于进一步探讨目的基因在Vero细胞凋亡作用的的分子机制.