腺病毒介导的激活大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞中NO/cGMP通路的实验研究

• 作者: 刘继红 叶章群 王少刚 王涛 袁慧星 詹鹰
• 来源期刊: 临床泌尿外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 勃起功能障碍 基因治疗 RNA激活 iNOS基因 大鼠
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 616-620,628
• 页数: 6页
• 分类号: R697
• 语种: 中文

摘要

目的:探讨靶向大鼠iNOS基因的shRNA重组腺病毒载体对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞iNOS基因的激活作用,为阴茎勃起功能障碍(ED)的基因治疗提供实验依据.方法:将前期构建的重组腺病毒Ad5-iNOSrshRNA-EGFP(AdU6/shiNOS)和对照病毒AdU6/shControl,分别转染大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞,分别在不同病毒MOI(25,50,75)值下72小时后采样检测.采用realtime RT-PCR半定量检测AdU6/shiNOS对细胞iNOS基因mRNA表达影响；Western-blot法检测海绵体平滑肌细胞iNOS蛋白表达变化.然后培养基中加L-Arg(10 mmol/L),用酶联免疫法检测病毒转染72小时后海绵体平滑肌细胞内cGMP的浓度变化,记录AdU6/shiNOS对平滑肌细胞内cGMP的影响.结果:AdU6/shiNOS转染大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞72小时后,和空白对照组、阴性对照组相比iNOS基因在mRNA和蛋白表达水平均显著上调(P＜0.05),呈剂量依赖性,MOI=75时RNAa效果最好.而且转染72小时后,实验组原代平滑肌细胞内cGMP水平显著高于对照组及空白组(P＜0.05).结论:利用腺病毒介导的RNAa技术,提高海绵体平滑肌细胞iNOS基因表达获得成功,可以增加阴茎海绵体平滑肌细胞cGMP水平,激活了NO/cGMP通路,这为勃起功能障碍的基因治疗研究开辟了新的方向.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘继红		303	2284	25.0	33.0
2	叶章群		497	4467	31.0	47.0
3	王涛		242	1347	16.0	25.0
4	王少刚		101	569	12.0	19.0
5	詹鹰		23	58	3.0	7.0
6	袁慧星		16	27	3.0	4.0