分泌抗春雷霉素单克隆杂交瘤细胞株的建立及免疫学特性鉴定

• 作者: 张小辉 张改平 李青梅 职爱民 胡骁飞 赵启发 陆启玉 龚芳
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 春雷霉素 人工抗原 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 兽医
• 页码范围: 417-423
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.02.021

摘要

[目的]制备高灵敏、高特异性的抗春雷霉素单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定.[方法]采用EDC法将KSM分别偶联于载体蛋白BSA和OVA上,分别合成免疫原KSM-BSA和包被原KSM-OVA,经SDS-PAGE鉴定后,免疫Balb/c小鼠,免疫间隔4周,4次免疫后,利用间接ELISA和间接竞争ELISA测定其多抗血清效价和敏感性,选出效价高、敏感性好的小鼠进行细胞融合,经过多次亚克隆筛选出分泌高敏感的特异性抗KSM单克隆抗体的杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备抗KSM的单克隆抗体并对其免疫学特性进行鉴定.[结果]SDS-PAGE鉴定结果显示KSM-BSA成功偶联,间接ELISA检测显示免疫的6只小鼠血清效价均达1:104以上,其中3号小鼠多抗血清敏感性最好,半数抑制浓度IC50为73.9ng·mL-1,融合后筛选出两株杂交瘤细胞株1G7和2C8,亚型均为IgG1型,其细胞上清效价分别为1:5.12×103和1:1.28 × 103,腹水效价分别为1:5.12×105和1:2.56 × 105,抗KSM的单克隆抗体对春雷霉素的IC50为8.902ng·mL-1,与其它竞争物的交叉率均小于0.03％.[结论]本试验成功合成了春雷霉素人工抗原,并制备了敏感性高、特异性好的单克隆抗体,为春雷霉素免疫学快速检测方法的建立奠定了基础.