稳定表达NDRG2的培养人晶状体上皮细胞株的建立及其对细胞增殖能力的影响

• 作者: 安洁 张丽霞 张健 张自峰 王雨生
• 来源期刊: 眼科新进展
• 关键词: NDRG2 晶状体上皮细胞 细胞增殖能力
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 415-418,422
• 页数: 5页
• 字数: 4490字
• 语种: 中文

摘要

目的 分别建立人N-Myc下游受调节基因2(N-Myc downstream regulated gene2,NDRG2)表达上调、下调的培养人晶状体上皮细胞稳定转染细胞株,并观察NDRG2对晶状体上皮细胞增殖能力的影响.方法 分别用质粒PLenti6-NDRG2、PLen-ti6-cherry、PLKO-NDRG2shRNA、PLKO-scramble以及PAX2和PMD2G构建慢病毒载体,感染培养人晶状体上皮细胞系(SRA01/04),通过药物筛选获得NDRG2表达上调、下调的晶状体上皮细胞株.采用Real-time PCR、Western blot等方法检测NDRG2的表达.通过MTT、EdU等方法检测所获得细胞株的生长曲线及增殖能力.结果 NDRG2 mRNA在过表达对照组和过表达组细胞中的相对表达量分别为1.04±0.38、6.57±0.97,两组间差异有统计学意义(P＜0.05);NDRG2 mRNA在干涉对照组和干涉组细胞中的表达量分别为1.05±0.31、0.49±0.14,两组间差异有统计学意义(P＜0.05).NDRG2过表达和干涉慢病毒载体感染后,SRA01/04细胞中NDRG2mRNA的表达分别出现了明显的上调和下调.Western blot检测结果显示:与各自对照组相比,在NDRG2过表达组和干涉组细胞中,NDRG2蛋白的表达量分别出现了明显的升高和降低.MTF检测结果显示:与其对照组相比,NDRG2过表达组细胞生长曲线表现出降低趋势,干涉组细胞生长曲线表现出升高趋势,在培养后5d检测时差异有统计学意义(P＜0.05).EdU检测结果显示:过表达对照组Cherry-SRA01/04细胞、过表达组NDRG2-SRA01/04细胞EdU阳性表达率分别为(41.57±2.53)％、(33.53±3.03)％,两组间差异有统计学意义(P＜0.05),提示NDRG2表达上调后DNA的合成受到抑制.干涉对照组Scramble-SRA01/04细胞和干涉组shNDRG2-SRA01/04细胞EdU阳性表达率分别为(27.70±1.05)％、(46.43±4.01)％,差异有统计学意义(P＜0.05),提示NDRG2表达下调后DNA合成速度加快.结论 通过病毒载体感染联合药物筛选,分别建立了NDRG2表达上调和下调的培养人晶状体上皮细胞稳定转染细胞株,且NDRG2基因对晶状体上皮细胞的增殖能力具有负向调节作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张健	第四军医大学生物化学与分子生物学教研室	57	236	8.0	11.0
2	安洁	解放军第451医院眼科	14	41	4.0	5.0