西尼罗病毒RNA复制子系统的建立与应用

• 作者: 姜涛 张富军 曹飞 朱舜亚 李晓峰 秦成峰 秦鄂德 赵慧 邓永强
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: RNA 西尼罗病毒 复制子 转染
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 114-117
• 页数: 4页
• 分类号: R373.3
• 字数: 3464字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2013.02.008

摘要

目的 构建具有复制和表达活性的RNA形式的西尼罗病毒(WNV)复制子.方法 在DNA形式的WNV复制子pWNrep的基础上,将其CMV启动子替换成SP6启动子,并在3'UTR端引入Pac Ⅰ酶切位点,构建复制子克隆pSP6-WNrep.同时,将增强型绿色荧光蛋白(eGFP)和海肾荧光素酶(R.luc)报告基因分别插入上述复制子质粒中,获得含有报告基因的复制子pSP6-WNrep/eGFP和pSP6-WNrep/R.hc.将上述克隆线性化后进行体外转录,将转录体RNA转染BHK-21细胞,观察不同时间点绿色荧光蛋白(GFP)的活性和R.luc活性.结果与结论 获得了WNV复制子pSP6-WNrep、pSP6-WNrep/eGFP和pSP6-WNrep/R.luc,酶切和测序鉴定结果显示,序列与预期一致.将含有报告基因的复制子转染细胞72 h后仍能观察到荧光信号,R.luc的活性随时间延长而增强.本研究成功构建了WNV Chin-01株的RNA复制子,该复制子能够在哺乳动物细胞中有效复制并表达外源蛋白,为下一步构建WNV单轮感染病毒样颗粒奠定了基础.