干扰EphA3的慢病毒lentivirus-1504的构建及其对肝癌细胞7402抑制作用研究

• 作者: 周建光 张晓清 李海量 潘耀振 王洪涛 罗国兰 薛萌 赵亚丽
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: EphA3 RNA,小分子干扰 慢病毒感染 癌基因 癌,肝细胞 7402
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 254-258
• 页数: 5页
• 分类号: R735.7
• 字数: 4080字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2013.04.004

摘要

目的 构建携带干扰癌基因EphA3的小干扰RNA(siRNA)慢病毒载体,并研究其对肝癌细胞7402的生长和迁徙的影响.方法 构建携带EphA3 siRNA的慢病毒载体质粒并将其与外源EphA3表达质粒共转染至人胚肾细胞293T中,Western 印迹检测其干扰EphA3蛋白表达的效果.将pSIH-H1-小发夹RNA(shRNA)-1504及空载体分别与3种包装质粒共转染293T细胞,包装成慢病毒lentivirus-1504及对照慢病毒.将所获慢病毒分别感染肝癌细胞7402,并加入嘌呤霉素(puromycin)筛选,1周后将细胞收集.Western印迹检测EphA3蛋白的表达水平,然后分别应用MTT实验、平板克隆形成实验、软琼脂克隆形成实验以及划痕实验检测敲低EphA3对肝癌细胞增殖能力、存活能力、恶性程度和迁移能力的影响.结果 lentivirus-1504抑制了7402细胞EphA3的表达,敲低EphA3后抑制了7402细胞的增殖能力、存活能力、恶性程度和迁移能力.结论 慢病毒lentivirus-1504能够明显抑制肝癌细胞7402的生长能力、存活能力、恶性程度和迁移能力,提示EphA3可能是一个新的肝癌治疗靶点.