WNT4基因沉默对PAX2诱导肾小管上皮细胞间充质转分化的影响

• 作者: 南晓娟 吴玉斌 李里
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: WNT4 配对盒基因2 肾小管上皮细胞 转分化 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 720-725,后插2-后插3
• 页数: 7页
• 分类号: R586
• 字数: 4238字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7694/jldxyxb20130416

摘要

目的:观察体外转染配对盒基因2 (PAX2)对WNT4通路的激活作用及WNT4通路对PAX2诱导转分化的作用,探讨PAX2转分化机制.方法:应用脂质体介导将重组质粒pEGFP-PAX2转染入体外培养的大鼠肾小管上皮细胞,经G418筛选,建立稳定表达PAX2细胞系.细胞分为稳定转染PAX2组、空载组和对照组.Western blotting法和实时荧光定量(Real-time) PCR法检测各组细胞WNT4和β-catenin表达.应用靶向WNT4基因的siRNA沉默稳定转染PAX2细胞的WNT4,应用荧光显微镜观察转染效率,进行沉默鉴定筛选出最佳干扰链.将最佳干扰链WNT4 siRNA转染至稳定转染PAX2细胞.在沉默24、48、72和96 h应用Western blotting法和Real-time PCR法检测β-catenin、正常肾小管上皮细胞表型标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)和成纤维细胞表型标志物α-肌动蛋白(α-SMA)表达,同时筛选出沉默最佳时间点.应用免疫组织化学染色法检测沉默最佳时间点组E-cadherin和α-SMA蛋白表达.结果:Western blotting和Real-time PCR检测,稳定转染PAX2细胞组WNT4和β-eatenin蛋白及mRNA表达水平较空载组和对照组明显增加(P＜0.05).阴性siRNA转染入稳定转染PAX2细胞24 h后荧光显微镜观察,转染效率为47.46％±4.48％.3条WNT4干扰链分别转染至稳定转染PAX2细胞,Real-time PCR和Western blotting结果显示第3干扰链沉默效果最佳,WNT4 mRNA表达抑制率为66.9％±3.8％(P＜0.05); WNT4蛋白表达抑制率为63.7％±2.5％(P＜0.05).将最佳干扰链转染至稳定转染PAX2细胞,干扰24、48、72和96 h后,各时间点细胞中的β-catenin mRNA及蛋白表达水平较对照组下调,72 h组下调明显(P＜0.05)；各时间点细胞中E-cadherin mRNA及蛋白表达水平较对照组明显上调,72 h组上调明显(P＜0.05)；各时间点细胞中α-SMA mRNA及蛋白表达水平较对照组明显下调,72 h下调明显(P＜0.05).结论:PAX2转染至肾小管上皮细胞后激活了WNT4通路,PAX2在体外诱导正常肾小管上皮细胞间充质转分化可能是通过WNT4/β-catenin通路完成.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴玉斌	中国医科大学附属盛京医院小儿肾脏风湿免疫科	122	469	11.0	15.0
2	李里	中国医科大学附属盛京医院小儿肾脏风湿免疫科	8	19	3.0	4.0
6	南晓娟	中国医科大学附属盛京医院小儿肾脏风湿免疫科	3	9	2.0	3.0