1株髓细胞瘤型J亚群禽白血病病毒感染性克隆的构建与病毒拯救

• 作者: 夏静 文心田 曹三杰 林艳 王富妍 赵扬 邹年莉 郭明萍 黄勇
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 髓细胞瘤型 J亚群禽白血病病毒 感染性克隆 分子标记 病毒拯救
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 754-759
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.3
• 字数: 4128字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2013.05.012

摘要

为构建髓细胞瘤型J亚群禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV-J) SCGS-1株前病毒cDNA分子标记感染性克隆,根据SCGS-1全基因测序结果,分3段进行全序列PCR扩增,顺次连接至pUC19,构建SCGS-1株前病毒cDNA感染性克隆pUC-SCGS;通过重叠PCR方法对SCGS-1基因组进行沉默突变,在4 684位点引入Sal I位点,构建SCGS-1株分子标记感染性克隆pUC-△SCGS;以pUC-SCGS和pUC-△SCGS重组质粒转染CEF进行病毒拯救,并通过PCR、间接免疫荧光与双抗体夹心ELISA进行拯救病毒检测.结果显示,成功构建pUC-SCGS与pUC-△SCGS重组质粒,转染后盲传第3代、第4代细胞与上清中均检测到拯救病毒;间接免疫荧光与抗原ELISA方法分别在CEF细胞和上清中检测到ALV-J抗原.成功拯救获得分子标记ALV-J.