转基因玉米中膦丝菌素乙酰转移酶双抗体夹心ELISA检测方法的建立

• 作者: 刘志浩 孙佳芝 杨正友 柴同杰 王新桐 高丽丽
• 来源期刊: 西北农林科技大学学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: PAT蛋白 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA Bt176
• 年，卷（期）: 2013,（11）
• 所属期刊栏目: 农业科学
• 页码范围: 45-50
• 页数: 6页
• 分类号: S513.021
• 字数: 5192字
• 语种: 中文

摘要

[目的]以单克隆抗体(monoclonal antibody,mAbs)为基础,建立检测膦丝菌素乙酰转移酶(thephosphinothricin acetyltransferase,PAT)的双抗体夹心ELISA方法,为转基因玉米PAT蛋白的检测提供参考.[方法]由P3301质粒扩增出膦丝菌素乙酰转移酶基因(blalaphos resistance gene)bar,并与表达载体pET28a构建重组质粒,诱导表达产生外源性PAT蛋白;以纯化后的PAT蛋白为免疫原,制备mAbs,建立双抗体夹心ELISA方法,并与PCR检测方法进行比较,确定该方法的准确性和可靠性.[结果]应用mAbs 4D5和3E8成功建立了检测PAT蛋白的双抗体夹心ELISA方法,其有效检测范围为3.125～50 ng/mL.采用该夹心ELISA方法对36份已知转基因背景的玉米样品进行了检测,根据阴阳性判定值OD450＞0.210,检测出含PAT蛋白的Bt176阳性样品4份,以bar基因为检测目标利用传统PCR方法也检测出相同的Bt176样品4份,2种检测方法的符合率为100％.[结论]利用建立的双抗体夹心ELISA免疫学检测方法,可以对转基因玉米中的PAT蛋白进行准确、特异、有效的检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	柴同杰	山东农业大学动物科技与动物医学院	161	1763	23.0	34.0
2	高丽丽	山东农业大学动物科技与动物医学院	5	35	4.0	5.0
3	杨正友	山东农业大学生命科学学院	9	59	4.0	7.0
4	刘志浩	山东农业大学动物科技与动物医学院	3	22	2.0	3.0
5	王新桐	山东农业大学动物科技与动物医学院	3	34	3.0	3.0
6	孙佳芝	山东农业大学动物科技与动物医学院	5	52	5.0	5.0