Sox4表达抑制对宣威地区女性肺癌细胞凋亡影响及其机制的探讨

• 作者: 刘馨 周永春 姚乾 杨世华 王熙才 金从国 陈艳 黄云超 黄尤光
• 来源期刊: 中华肿瘤防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: sox4 女性 肺肿瘤 宣威 细胞凋亡 基因表达
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 所属期刊栏目: 前沿报道/论著
• 页码范围: 572-579
• 分类号: R734.2
• 语种: 中文

摘要

目的:研究靶向抑制sox4基因的表达对宣威地区女性肺癌细胞凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法:构建靶向抑制转录因子sox4的shRNA重组载体pGFP-V-RS-sox4shRNA并转染宣威地区女性肺癌细胞XWLC-05,以转染pGFP-V-RS-scramshRNA的XWLC-05细胞及亲本XWLC-05细胞作为对照,研究sox4表达抑制对Caspase-3表达、细胞形态、细胞周期和凋亡率等凋亡指标的影响.使用Caspase-3抑制剂z-VAD-FMK处理转染细胞,检测上述细胞凋亡指标.结果:成功构建了能高效抑制sox4基因表达的pGFP-V-RS-A-sox4shRNA重组载体；转染后48及72 h,实验组细胞sox4 mRNA表达水平分别为0.09±0.018及0.44±0.06,比转染后24 h降低了88％和40％,与同一时段中的阴性对照及空白对照组相比表达水平明显降低(P＜0.05),其中以转染后48 h的抑制最为明显,而Caspase-3 mRNA表达与阴性对照及空白对照组相比均明显升高(P＜0.05),以48 h升高最明显；空白对照组与阴性对照组间比较,转染48及72 h后sox4 mRNA(P=0.071；P=0.063)和Caspase-3 mRNA(P=0.103;P=0.229)的表达水平差异无统计学意义；抑制sox4基因的表达后细胞出现典型的凋亡形态学改变；流式细胞术(FCM)检测显示,转染干扰质粒后48 h,细胞出现明显的亚二倍体峰,实验组细胞的凋亡率平均为(34.8±3.37)％,显著高于阴性对照组(0.45±0.05)％及空白对照组(0.44±0.06)％,P均为0.000.经z-VAD-FMK阻断Caspase-3酶活性后,实验组细胞中活化的Caspase-3 (13.6±1.76)％显著低于阴性对照组(50.5±6.15)％,差异有统计学意义,P=0.000；实验组细胞的凋亡率(10.8±1.05)％也明显低于阴性对照组细胞(38.3±3.16)％,P=0.000.结论:抑制sox4的表达可促进宣威地区女性肺癌细胞凋亡；转录因子sox4可能通过抑制Caspase-3依赖的凋亡途径而促进宣威地区女性肺癌的发生发展.