基于内部核糖体进入位点提高重组NDV表达IBDV VP2基因的研究

• 作者: 任桂萍 何金娇 刘雪莹 吴云舟 安莹 尹杰超 李德山 郭茉 韩晓辉
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 重组新城疫病毒 vvIBDV VP2基因 IRES
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 免疫学
• 页码范围: 485-489
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 字数: 3361字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0589.2013.06.14

摘要

为提高重组新城疫病毒(NDV)外源基因表达量,本研究采用内部核糖体进入位点序列(IRES)构建表达鸡传染性法氏囊病病毒超强毒(vvIBDV) HLJ07株VP2双拷贝基因的重组NDV(rClone30-VP2-IRES-VP2),同时构建表达单拷贝VP2基因的重组NDV (rClone30-VP2)作为对照.间接免疫荧光试验表明VP2蛋白在感染两种重组病毒的鸡胚成纤维细胞(DF-1)中得到表达.Real-time PCR检测结果表明rCIone30-VP2-IRES-VP2中VP2 mRNA转录水平明显高于rClone30-VP2.生长曲线分析表明,两株重组病毒株与亲本NDV LaSota (Clone30)株在细胞培养中可以同样稳定复制.重组病毒株在鸡胚中多次传代之后仍稳定表达VP2蛋白.本研究通过建立NDV的反向遗传操作系统构建了独立表达IBDV双拷贝VP2基因的重组NDV,并证明双拷贝基因的表达水平优于单拷贝基因,为提高重组NDV外源基因的表达量提供了新的思路.