HPLC-RF测定小鼠肝微粒体中CYP2A5的酶活性

• 作者: 于超 张有金 张远冬 杨竹 王二豪 王应雄 石亮 郭延垒
• 来源期刊: 中国临床药理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 高效液相色谱-荧光检测法 细胞色素P4502A5 香豆素 7-羟基香豆素 小鼠肝微粒体
• 年，卷（期）: 2013,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 692-694,697
• 页数: 4页
• 分类号: R969.1|R965.2
• 字数: 2548字
• 语种: 中文

摘要

目的 以香豆素为探针底物建立测定小鼠肝微粒体中CYP2A5酶活性的方法.方法 用Waters Symmetry C18柱；流动相为0.1％醋酸-乙腈=70∶ 30;流速为1.0 mL·min-1,柱温30℃,Ex=340 nm,Em =458 nm.香豆素与小鼠肝微粒体在37℃孵育20 min,加入含内标的冰乙腈终止,4℃、12000 r·min-1离心15 min,取上清液,用HPLC测定其代谢产物7-羟基香豆素的含量,以GraphPad Prism 5.0作图计算酶动力学参数.结果 7-羟基香豆素与内标两者分离良好.7-羟基香豆素的检测限为2nmol · L-1(S/N≥3),线性范围为8～ 800 nmol·L-.日内日间精密度RSD小于5％,回收率为91.3％～101.4％.香豆素羟化反应的Km为2.15 μmol·L-1；Vmax为9.74 pmol·(min·mg protein)-1.结论 该方法稳定可靠,灵敏度高,适于体外CYP2A5酶活性的测定.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王应雄	重庆医科大学生命科学研究院	165	620	13.0	17.0
2	于超	重庆医科大学生命科学研究院	68	655	14.0	23.0
3	杨竹	重庆医科大学生命科学研究院	98	654	12.0	21.0
4	张远冬	重庆医科大学生命科学研究院	4	20	3.0	4.0
5	张有金	重庆医科大学生命科学研究院	9	29	3.0	5.0
6	郭延垒	重庆医科大学生命科学研究院	16	56	4.0	7.0
7	王二豪	重庆医科大学生命科学研究院	5	9	2.0	3.0
8	石亮	重庆医科大学生命科学研究院	4	9	2.0	3.0