定点突变提高细胞色素P450 BM-3吲哚羟基化能力

• 作者: 姚善泾 张彭湃 梅乐和 胡升 金志华 雷引林 黄俊
• 来源期刊: 化工学报
• 关键词: 细胞色素P450 BM-3 定点突变 羟基化 吲哚 靛蓝
• 年，卷（期）: 2013,（9）
• 所属期刊栏目: 生物化学工程与技术
• 页码范围: 3331-3337
• 页数: 7页
• 分类号: TQ962.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0438-1157.2013.09.035

摘要

为进一步提高细胞色素P450 BM-3 (A74G/F87V/L188Q)对吲哚的羟基化能力,根据酶结构与功能的关系,以突变酶E435T为基础,在168位点引入D168L突变,获得了吲哚羟基化能力得到显著提高的突变酶D168L/E435T.突变酶对吲哚的Km为1.72 mmol·L-1(父本2.09 mmol·L-1),转化数(kcat)为28.15min-1(父本4.04 min-1),表明D168L定点突变可以略微提高酶对底物的亲和力,但主要的效应是促进了底物的转化速率,这两个效应的综合表现是使酶的催化效率(kcat Km-1)比父本酶提高了8.48倍.此外,产物中副产物靛玉红的比例也降低为1.2％(父本7.3％),这说明该突变酶催化吲哚的区域选择性上也更有利于靛蓝的生成.