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摘要:
为了提高细胞色素单加氧酶P450 BM-3的热稳定性,采用半理性设计策略对该酶进行了分子改造。首先采用B-FITTER软件分析了P450 BM-3晶体结构中各氨基酸残基位点的温度因子(B- factor),识别出了一个对酶的热稳定性有不利影响的关键氨基酸残基位点G46,然后以P450 BM-3(A74G/F87V/L188Q/D422G)为亲本酶在该位点进行定点饱和突变构建了突变文库,并从饱和突变文库中筛选获得了一个热稳定性得到显著提高的突变酶 P450 BM-3(A74G/F87V/L188Q/D422G/G46S)。该突变酶(G46S)的半失活温度(T5010)比亲本酶提高了5℃(达到48℃;在50℃的半衰期t1/2比亲本酶延长了一倍。同时,突变酶的酶学性质也得到明显改善,与亲本相比,突变酶Km降低了22%, kcat提高了90%,催化效率kcat/Km(67.42 L×(mmol×min)-1)比亲本提高了1.48倍。这说明G46位点不仅影响酶的热稳定性,还影响酶对底物的结合与催化性能。G46S突变酶的获得表明,只要采用适当的半理性设计策略对正确的位点进行分子改造,可以在提高酶的热稳定性的同时,保持或甚至提高酶的催化活性。
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关键词热度
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文献信息
篇名 细胞色素P450 BM-3热稳定性的半理性改造?
来源期刊 高校化学工程学报 学科 工学
关键词 P450 BM-3 半理性分子改造 热稳定性 温度因子 B-FITTER
年,卷(期) 2015,(5) 所属期刊栏目 生物化工
研究方向 页码范围 1138-1144
页数 7页 分类号 TQ962.2
字数 6213字 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.1003-9015.2015.00.019
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研究主题发展历程
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P450 BM-3
半理性分子改造
热稳定性
温度因子
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高校化学工程学报
双月刊
1003-9015
33-1141/TQ
大16开
杭州 浙江大学玉泉校区化学工程与生物工程学系
1986
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