基于抗原-抗体共表达的细菌展示技术的优化

• 作者: 任桂萍 尹杰超 徐黎明 李德山 郭茉
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 周质空间 抗原抗体共表达 流式细胞仪筛选 抗体库筛选 蛋白相互作用
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 396-399
• 分类号: R392.33|R378
• 语种: 中文

摘要

目的 建立细菌周质内抗原抗体共表达系统.方法 将人白介素-1β(hIL-lβ)基因和抗人白介素1β单链抗体(antihIL-1β scFv)基因分别插入到细菌展示载体pBFD的pelB前导肽(游离型前导肽)和NlpA前导肽(锚定型前导肽)下游构建出重组载体pBFD-Ab-Ag.将pBFD-Ab-Ag转入到E.coli DH5α中诱导表达,抗原和抗体蛋白相互结合而被锚定到细菌内膜外侧,破除细菌外壁(原生质球制备)后与适当浓度的FITC标记的小鼠抗hIL-1β抗体进行孵育,最后经流式细胞仪检测荧光信号,根据荧光信号强弱分析抗原抗体表达和相互作用情况.结果 pBFD-Ab-Ag E.coli DH5α具有很强的荧光信号,阳性率获得了大大的提高.结论 成功建立了建立细菌周质内抗原抗体共表达系统,实现了抗体和抗原细菌周质内的正确折叠和相互识别.简化了现有的抗体筛选的流程,为蛋白质相互作用的研究提供了新的技术手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	任桂萍	东北农业大学生命科学学院生物制药教研室	62	253	8.0	13.0
2	尹杰超	东北农业大学生命科学学院生物制药教研室	20	106	4.0	10.0
3	李德山	东北农业大学生命科学学院生物制药教研室	66	240	8.0	13.0
4	徐黎明	中国水产科学研究院黑龙江水产研究所	26	65	5.0	6.0
5	郭茉	东北农业大学生命科学学院生物制药教研室	3	0	0.0	0.0