苦瓜抗白粉病SRAP标记筛选的PCR体系优化与验证

• 作者: 周生茂 尚小红 文俊丽 梁任繁 梁和 米军红 车江旅 郭元元 黄如葵
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 苦瓜 SRAP-PCR 体系优化 筛选 验证
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子生物学
• 页码范围: 898-902
• 页数: 5页
• 分类号: S642.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2013.6.898

摘要

[目的]优化苦瓜抗白粉病SRAP标记的PCR体系,为获得苦瓜抗白粉病的SRAP分子标记、加快苦瓜抗白粉病新品种的选育提供参考.[方法]采用正交设计L16(45),在已有SRAP-PCR扩增程序基础上,以苦瓜抗、感白粉病的父母本及其杂交后代基因组DNA为模板,用4对SRAP引物对模板DNA、dNTPs、Mg2+、引物、Taq DNA聚合酶等5个因素浓度进行优化组合和验证.[结果]提取的苦瓜基因组DNA纯度较好,无蛋白质、RNA等物质污染,其纯度和完整性较好.利用引物对ME9-EM11进行PCR扩增,16个不同因素组合处理在苦瓜父本MC18和母本MC 1-2的基因组DNA间的扩增结果有明显差异,其中以处理3的SRAP-PCR体系(20.0 μL:DNA 5.0 ng/μL、dNTP 0.05 mmol/L、Mg2+2.5 mmol/L、引物0.6 μmol/L、Taq DNA聚合酶0.088 U/μL)获得较清晰、较多的扩增条带.用4对引物对验证优化的SRAP-PCR体系,其重复性好,不同苦瓜材料间无明显的多态性.[结论]优化的SRAP-PCR体系适用于苦瓜抗白粉病SRAP分子标记的筛选.