植物罹病组织中象耳豆根结线虫的LAMP快速检测方法

• 作者: 丁中 何旭峰 彭德良 彭焕 贺文婷 黄文坤
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 象耳豆根结线虫 环介导恒温扩增 特异性 灵敏度 快速检测
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 植物保护
• 页码范围: 534-544
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.03.010

摘要

[目的]建立一种基于环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,从植物罹病组织中直接检测象耳豆根结线虫(Meloidogyne enterolobii)的快速检测方法,为象耳豆根结线虫的监测和防治提供技术支持.[方法]根据象耳豆根结线虫与其它根结线虫ITS序列差异设计LAMP特异性引物,通过对LAMP反应条件中的Mg2+、dNTPs、甜菜碱和反应时间进行优化,同时对检测体系的特异性和灵敏度进行验证,建立一种从罹病植物组织中检测象耳豆根结线虫的LAMP快速检测方法.[结果]象耳豆根结线虫LAMP检测体系优化结果表明在Mg2+的浓度为5.0 mmol·L-1、dNTPs的浓度为2.4 mmol·L-1、不添加甜菜碱、反应时间为45 min的条件下,扩增效率最优.本研究建立的LAMP检测方法能够从11个植物线虫种群中特异检测出象耳豆根结线虫,检测灵敏度为1/200000头线虫DNA,比普通PCR灵敏1 00倍,能够直接从植物根结中检测出象耳豆根结线虫,准确度为1 00％.[结论]本研究以rDNA-ITS序列为靶基因建立象耳豆根结线虫LAMP快速分子检测方法,具有特异性强、灵敏度高、简单、快速、经济等特征,能够从罹病植物组织中快速准确地检测出象耳豆根结线虫,具有极高的实践应用价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	丁中	湖南农业大学物安全科技学院	19	307	10.0	17.0
2	何旭峰	中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室	6	56	3.0	6.0
4	黄文坤	中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室	34	304	12.0	15.0
5	贺文婷	中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室	11	93	5.0	9.0
8	彭焕	中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室	14	102	7.0	9.0