山茶根结线虫的LAMP-LFD快速检测方法

• 作者: 周前进 蔡怡 陈先锋 陈炯 顾建锋
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 山茶根结线虫 环介导等温扩增(LAMP) 横向流动试纸条(LFD) 检测
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改进
• 页码范围: 770-780
• 分类号: S432.4+5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2016.05.016

摘要

为了提高检测效率,本研究利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)扩增核酸,用横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)检测产物,建立了一种山茶根结线虫(Meloidogyne camelliae)的LAMP-LFD快速检测新技术.以山茶根结线虫核糖体DNA内转录间隔区(ribosomal DNA-intemal transcribed spacer,rDNA-ITS)为检测靶标,设计3对特异性引物进行生物素标记的实时荧光LAMP反应,优化后的LAMP扩增条件为63℃反应15 min.比较LFD、实时荧光曲线以及琼脂糖凝胶电泳等3种产物检测方法,结果表明,LAMP产物与异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的探针ITS-HP杂交5 min后即可在LFD上显色,从LAMP反应开始到LFD结果判断仅需25min,比常规PCR技术缩短约2h.LAMP-LFD技术能特异性地检测山茶根结线虫,对其基因组DNA的检测灵敏度为4 pg/μL,低于常规PCR方法100倍;对其单条2龄幼虫(J2)检测灵敏度为1/1 000条线虫.本研究建立的快速、灵敏、特异性LAMP-LFD检测技术可应用于山茶根结线虫的口岸检验.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈炯	宁波大学生物与海洋科学系	100	594	13.0	18.0
2	周前进	宁波大学生物与海洋科学系	14	95	6.0	9.0
3	陈先锋	宁波大学生物与海洋科学系	22	48	4.0	5.0
7	蔡怡	宁波大学生物与海洋科学系	4	23	3.0	4.0
8	顾建锋		6	23	4.0	4.0