感染新型鸭呼肠孤病毒的番鸭肝脏蛋白质组双向电泳方法的建立

• 作者: 朱果真 程晓霞 郑敏 陈仕龙 陈少莺 黄梅清
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 农学
• 关键词: 番鸭 肝脏 蛋白质组 新型鸭呼肠孤病毒
• 年，卷（期）: 2013,（26）
• 所属期刊栏目: 兽医—应用研究
• 页码范围: 19-24
• 页数: 6页
• 分类号: S852.65
• 字数: 4757字
• 语种: 中文

摘要

为建立感染新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)的番鸭肝脏蛋白质组双向电泳(2-DE)方法.本研究通过对人工感染NDRV的雏番鸭肝脏病变的观察,对肝脏蛋白质提取裂解液的配方、样品上样量、一向等电聚焦(IEF)参数等条件的对比和优化,建立了有效的番鸭肝脏2-DE方法.结果表明:采用攻毒后病变最典型的第5天的番鸭肝脏作为研究样品;采用研磨-超声-裂解液(7mol/L尿素、2mol/L硫脲、4％CHAPS、65mmol/L DTT、40mmol/L Tris-base、0.5％ IPG buffer)法提取肝脏蛋白质,结合2D clean-up kit以及去拖尾DeStreak试剂纯化蛋白,按1100μg上样,设置IEF参数为:50V12h、200V 1.5h、500V 1h、1000V 1h、8000V 3h、8000V 60000Vh、500V维持,采用胶体考马斯亮蓝染色,能获得分辨率高、重复性好的2-DE图谱.应用建立的2-DE方法和PDQest 8.0分析软件,发现26个与正常番鸭肝脏蛋白表达水平超过3倍的差异蛋白点.该方法的建立为进一步寻找NDRV感染宿主组织相关蛋白以及水禽呼肠孤病毒差异蛋白质组学研究提供了技术支持.