猪流行性腹泻病毒Real-time PCR检测方法的建立

• 作者: 单晶晶 周双海 孟凡伟 张雪 王俊 王志军 王鹏
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流行性腹泻病毒 SYBR Green Ⅰ Real-time PCR 定量检测
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 兽医—应用研究
• 页码范围: 41-45
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文

摘要

为定量检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)载量,建立PEDV的Real-time PCR方法.用RT-PCR方法扩增PEDV的M基因片段,构建含有M基因片段的重组质粒,用该重组质粒进行SYBR Green ⅠReal-time PCR,来建立检测PEDV的荧光定量PCR方法.结果显示:在(5.56× 102～5.56× 107)拷贝/μL范围内,所建立方法具有优良的线性关系,其决定系数为0.9996,扩增效率为99.5％,扩增产物的熔解曲线只有一个特异性峰,无引物二聚体峰,熔解温度为(81.18±0.21)℃.该方法对猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒Ⅱ型等猪源病毒均检测不到扩增产物,重复性试验的变异系数小于3％,对临床样品的检出率高于常规PCR方法.研究结果表明:建立的Real-time PCR检测方法特异性强、重复性好、灵敏性高,可用于PEDV的定量检测及其早期感染的快速诊断.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周双海	北京农学院动物科学技术学院	59	192	8.0	10.0
2	张雪	北京农学院动物科学技术学院	7	43	3.0	6.0
3	孟凡伟	北京农学院动物科学技术学院	10	34	4.0	5.0
4	王俊	北京农学院动物科学技术学院	9	19	3.0	4.0
5	单晶晶	北京农学院动物科学技术学院	7	34	4.0	5.0
6	王鹏	北京农学院动物科学技术学院	2	19	2.0	2.0