mir-7-3基因慢病毒表达载体的构建及对人胶质瘤细胞生长抑制作用的研究

• 作者: 宿建辉 张恒柱 李健 武永康 董伦 韩崇旭
• 来源期刊: 中华神经医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: mir-7-3 慢病毒 表皮生长因子 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶2 神经胶质瘤 增殖
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2-6
• 页数: 5页
• 分类号: R730.264
• 字数: 4664字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1671-8925.2014.01.001

摘要

目的 构建mir-7-3基因慢病毒表达载体,研究mir-7-3基因的功能及其在胶质瘤基因治疗中的应用. 方法 将Lenti-GFP-mir-7-3质粒和包装质粒pRsv-REV、pMDlg-pRRE、pMD2G共同转染至人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带mir-7-3基因和绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组慢病毒FIV-CMV-GFP-mir-7-3,荧光显微镜下观察293T细胞的荧光表达;取浓缩纯化后的病毒上清感染人胶质瘤细胞U251作为转染组,同时设转染空载病毒的阴性对照组和空白对照组,RT-PCR鉴定U251细胞中mir-7-3基因的表达水平.Westem blotting检测转染后48 h细胞表皮生长因子受体(EGFR)及丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT2)蛋白的表达.MTT法检测转染后1～6 d细胞存活率的变化.流式细胞术检测转染后48 h细胞周期的变化. 结果 Lenti-GFP-mir-7-3共转染包装细胞293T能产生高浓度的重组慢病毒FIV-CMV-GFP-mir-7-3,荧光显微镜下能直接观察到GFP,FIV-CMV-GFP-mir-7-3中携有正确的mir-7-3基因,目的基因mir-7-3能被重组慢病毒高效地导入U251.与空白对照组和阴性对照组比较,转染后48 h转染组细胞EGFR及AKT2蛋白的表达下降(AKT2表达下调42％,EGFR表达下调38％).G0/G1期细胞增加,S期细胞数目下降,转染3、4、5、6d后转染组细胞存活率降低,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 成功构建了携带mir-7-3基因的重组慢病毒载体;mir-7-3有效地抑制EGFR通路表达,抑制细胞周期G1期向S期转化,抑制胶质瘤增殖,因此mir-7-3有可能成为胶质瘤基因治疗的候选药物.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	董伦	扬州大学临床医学院神经外科	39	168	7.0	11.0
2	武永康	扬州大学临床医学院医务科	47	122	6.0	8.0
3	张恒柱	扬州大学临床医学院中心实验室	71	255	8.0	13.0
4	李健	扬州大学临床医学院神经外科	10	23	3.0	4.0
5	宿建辉	扬州大学临床医学院神经外科	6	19	3.0	4.0
6	韩崇旭	扬州大学临床医学院神经外科	12	28	4.0	5.0