免疫磁珠富集联合荧光定量PCR快速检测牛肉馅中产志贺毒素大肠埃希菌O26∶H11

• 作者: 吴青 徐进 李凤琴 王伟 白莉 胡豫杰 赫英英 韩春卉
• 来源期刊: 中国食品卫生杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 产志贺毒素大肠埃希菌O26∶H11 牛肉馅 免疫磁珠分离 实时荧光定量PCR 食源性致病菌 食品安全
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 实验技术与方法
• 页码范围: 30-35
• 分类号: R155.5|R378.2+1|TS207.4
• 语种: 中文

摘要

目的 建立肉制品中免疫磁珠富集(IMS)联合实时荧光定量PCR(qPCR)技术快速检测牛肉馅中产志贺毒素大肠埃希菌(STEC) O26∶ H11的方法.方法 建立针对编码O26抗原wzx基因实时荧光定量PCR方法,并验证其特异性和敏感性;人工污染不同浓度STEC O26∶H11的牛肉馅样品,在增菌不同时间后,将增菌液原液、增菌液经免疫磁珠特异性捕获分离物分别进行qPCR检测及平板分离.结果 qPCR检测O26∶ H11可产生特异性荧光信号,而23株其他血清型的大肠埃希菌及7株其他种属细菌均未见荧光信号;本方法对纯培养的检测限为5 × 102 cfu/ml.人工染菌试验中,当初始染菌浓度达到或高于3×102 cfu/25 g时,增菌培养6h后IMS捕获物可以检测到荧光信号.培养20 h后,初始染菌浓度为3×10-1 cfu/25 g以上,对增菌液直接检测和IMS捕获物检测都可以检测到荧光信号.初始污染浓度较低时,增菌6h后IMS-qPCR的检测灵敏度高于增菌液直接qPCR检测;IMS捕获物涂布显色培养基分离目标菌检测灵敏度高于增菌液直接涂布;CHROMagar STEC显色培养基分离STECO26∶H11的检测灵敏度高于山梨醇麦康凯培养基(SMAC).结论 IMS联合qPCR检测食品中的STEC O26∶ H11具有特异性强、敏感度高、快速、易操作等特点,可以提高样品中STEC O26∶ H11菌的检出率,适用于牛肉制品中STEC O26:H11的快速检测.