单增李斯特菌胶体金免疫层析试纸条的研制

• 作者: 孟宪荣 张超 栗绍文 潘秀华 蔡旭旺 谢世琦 闫少侠
• 来源期刊: 中国食品卫生杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 单增李斯特菌 InlA蛋白 单克隆抗体 胶体金免疫层析检测试纸条 食源性致病菌
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 115-119
• 分类号: R155|R378.99+4|Q511
• 语种: 中文
• DOI: 10.13590/j.cjfh.2014.02.003

摘要

目的 以单增李斯特菌(LM)内化素A蛋白(InlA)单克隆抗体为基础,研制其胶体金免疫层析检测试纸条.方法 采用DNAStar软件对LM inlA全长基因编码蛋白进行抗原表位分析,截取部分inlA基因片段构建原核表达质粒,诱导表达和纯化获得重组蛋白.以该蛋白免疫BALB/c小鼠,筛选高效分泌抗InlA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体;以双抗体夹心的原理研制胶体金免疫层析检测试纸条,并对其特异性、敏感性、稳定性进行评价.结果 筛选到2株高效分泌抗InlA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,抗体属于IgG1亚类,小鼠腹水抗体效价为1∶64 000;研制的试纸条可与LM发生阳性反应,而与非LM李斯特菌、链球菌、鼠伤寒沙门菌、大肠杆菌O157∶H7等食源性致病菌均不发生阳性反应;LM纯培养物敏感性为2.4×105 cfu/ml,模拟猪肉样品敏感性为4.0×106 cfu/ml;4℃保存期可达16周以上.结论 研制的胶体金免疫层析试纸条具有快速、特异、敏感等优点,可以用于样品中LM的快速检测.