小鼠Tox3基因重组慢病毒载体的构建及其在卵巢颗粒细胞中的表达

• 作者: 崔玉倩 徐海静 王文婷 赵世斗 赵涵 郭海鹏 陈子江 马增香
• 来源期刊: 国际生殖健康/计划生育杂志
• 关键词: Tox3 慢病毒载体 粒层细胞 小鼠
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 95-98,封3
• 页数: 5页
• 字数: 4724字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建重组慢病毒载体pCDH-Tox3-Flag,并检测其转染小鼠原代卵泡颗粒细胞后的表达情况.方法:利用DNA重组技术将小鼠Tox3基因克隆入慢病毒表达载体pCDH-MCS-T2A-copGFP-MSCV中,通过酶切、测序验证后,将重组慢病毒载体pCDH-Tox3-Flag、包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共转染HEK293FT细胞,包装重组慢病毒LV-Tox3-Flag,并感染小鼠原代颗粒细胞,用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Tox3 mRNA的转录水平,蛋白质印迹(Western blot)法检测TOX3-Flag蛋白的表达情况.结果:经酶切及测序结果证实,构建了重组慢病毒载体LV-Tox3;RT-PCR及Western blot结果显示慢病毒感染小鼠原代颗粒细胞后,Tox3基因能在细胞内正确转录、翻译并稳定表达TOX3蛋白.结论:成功建立Tox3基因慢病毒表达载体L V-Tox3-Flag,包装的慢病毒能够成功感染小鼠原代颗粒细胞,并使Tox3基因得到稳定表达,为后续研究Tox3基因在生殖相关疾病的生理与病理作用奠定了基础.