小鼠胚胎成纤维细胞制备及小鼠胚胎干细胞E14TG2a的培养

• 作者: 张韬 林芳 金静君 陈泳
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 医学
• 关键词: 小鼠 胚胎成纤维细胞 胚胎干细胞 细胞培养
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 515-520
• 页数: 6页
• 分类号: R965.2
• 语种: 中文

摘要

建立稳定有效的小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblast cells,MEFs)分离培养和制备体系,用于小鼠胚胎干细胞E14TG2a的扩培.从怀孕12.5 d～14.5 d的昆明小鼠分离培养原代MEFs;取P3代的MEFs,使用丝裂霉素C处理以抑制其增殖能力,以此制备小鼠饲养层细胞.在饲养层细胞上扩培E14TG2a细胞.碱性磷酸酶染色以确定细胞是否处于未分化状态;细胞周期检测以观察细胞增殖特性;核型分析检测E14TG2a细胞核型;RT-PCR以检测全能性基因Oct-4和Nanog表达.使用组织消化法可成功分离制备MEFs.制备的滋养层细胞能够支持E14TG2a细胞克隆样生长.碱性磷酸酶检测呈阳性;细胞周期分析结果表明增殖指数为65.83％,传代培养的细胞E14TG2a保持快速增殖特性;核型检测E14TG2a细胞保持正常核型;RT-PCR检测出Oct-4和Nanog基因正常表达.建立了稳定有效的MEFs分离培养和制备体系,用于E14TG2a细胞的扩培.