利用细胞培养基或动物血浆中的荧光标记产物测定鞘磷脂合酶活性

• 作者: 丁庭波 楼滨 董继斌 蒋宪成
• 来源期刊: 中国药学（英文版）
• 学科: 医学
• 关键词: 鞘磷脂合酶 酶活性测定 鞘磷脂合酶抑制剂筛选 鞘磷脂 神经酰胺
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 256-261
• 页数: 6页
• 分类号: R963
• 语种: 中文

摘要

鞘磷脂合酶(SMS)催化神经酰胺(ceramide,Cer.)转变为鞘磷脂(sphingomyelin,SM).近来的研究表明神经酰胺和鞘磷脂参与了代谢综合征的过程,因而鞘磷脂合酶被认为是开发抗代谢综合征药物的潜在靶点.鞘磷脂合酶有两个同工酶,分别称为鞘磷脂合酶1 (SMS1)和鞘磷脂合酶2(SMS2).这两种同工酶的亚细胞定位不同,在不同组织中的表达水平也有差异.到目前为止,己发表有多种方法测定组织和细胞匀浆中的总SMS活性,这些方法通过分析总反应体系或细胞内的酶促反应产物来衡量SMS活性.本文介绍一种测定SMS活性或筛选SMS抑制剂的新方法.我们将荧光标记的神经酰胺(NBD-Cer.)作为底物与细胞孵育,或者将该底物注射到小鼠体内,然后监测在细胞培养基或小鼠血浆中出现的荧光标记的鞘磷脂(NBD-SM)的含量.采用这种办法可有效检测出D609(一种鞘磷脂合酶抑制剂)对细胞和小鼠整体SMS活性的抑制作用.我们进一步采用该方法检测了SMS1基因敲除小鼠和SMS2基因敲除小鼠的SMS活性,结果发现注射底物后,SMS2基因敲除小鼠(而不是SMS1基因敲除小鼠)血浆中NBD-SM的堆积被明显阻断.因而该方法可用于检测生理或药理条件下在体或离体组织的SMS活性、筛选SMS抑制剂、甚至筛选SMS2特异性抑制剂.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	董继斌		8	34	2.0	5.0
2	楼滨		8	28	3.0	5.0
3	丁庭波		2	0	0.0	0.0
4	蒋宪成		2	0	0.0	0.0