PKH26荧光标记牛尾髓核细胞的实验研究

• 作者: 丁晓明 伍耀宏 张扬 张春秋 徐宝山 李秀兰 杨强 许海委 马信龙
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 组织工程 椎间盘 牛尾 髓核细胞 PKH26
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 所属期刊栏目: 细胞与分子生物学
• 页码范围: 849-852
• 页数: 4页
• 分类号: R329-33|R349.89
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2014.09.001

摘要

目的：探讨PKH26荧光标记在牛尾髓核细胞的应用，为髓核组织工程的体内研究提供可示踪的种子细胞。方法从牛尾椎间盘中分离髓核组织，通过酶消化法获取原代细胞，倒置显微镜下观察，P1代髓核细胞进行番红O、甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色，对P1代髓核细胞进行PKH26荧光染料标记，并对标记后细胞的活性、荧光强度（0、14、28 d）、增殖特性及基因表达进行评估。结果分离得到的髓核细胞数为（1.56±0.35）×106/g，倒置显微镜下，原代细胞培养4 d开始贴壁，细胞成群生长，14 d铺满瓶底，原代细胞、P1代细胞均呈类软骨样细胞形态；P1代髓核细胞甲苯胺蓝染色异染、番红O染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色阳性；PKH26标记前后细胞活性均在95%以上，1、14、28 d呈递减趋势，但28 d时细胞仍可检测出较强的荧光，标记后的细胞增殖及基因表达（Ⅰ、Ⅱ型胶原及聚集蛋白聚糖）与标记前的细胞相比差异无统计学意义（P＞0.05）。结论牛尾髓核组织中可以分离出数量满意的髓核细胞，且具有软骨样细胞的表型，可以用作种子细胞；PKH26标记后的髓核细胞无生物学特性的变化，可以用作髓核细胞体内研究的示踪染料。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐宝山		74	978	14.0	29.0
2	杨强		42	331	8.0	16.0
3	李秀兰		26	103	6.0	8.0
4	马信龙		143	1253	18.0	28.0
5	张春秋		58	225	7.0	10.0
6	丁晓明	天津医科大学研究生院	4	15	3.0	3.0
7	张扬		7	9	2.0	2.0
8	许海委		21	79	4.0	8.0
9	伍耀宏	天津医科大学研究生院	5	14	3.0	3.0