一种降低dATP用量的简单易错PCR方法

• 作者: 吕孟雨 孙果忠 杨学举 王海波 赵和 高义平
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 易错PCR 体外诱变 碱基突变 序列变异 洋葱抗菌蛋白基因 Bt基因
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 方法
• 页码范围: 97-103
• 分类号: Q93-3
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.2014.01.012

摘要

易错PCR是基因体外诱变的主要方法之一,是通过在PCR体系中添加Mn2+、提高Mg2+浓度和dCTP/dTTP浓度等措施达到基因诱变的目的.[目的和方法]本研究在不添加Mn2、不调整其它任何PCR成分的情况下,通过降低dATP浓度的底物不平衡作用,对洋葱抗菌蛋白基因Ace-AMP1和苏云金芽胞杆菌毒蛋白(Bt)基因crylA(c)进行了PCR诱变.[结果]结果表明:随着dATP浓度的降低,序列变异率和碱基突变率均呈升高趋势.当dTTP/dCTP/dGTP:dATP在20∶1-40∶1时,碱基突变率介于1.4％-1.8％之间,序列变异率介于77.8％-100％之间.[讨论和结论]该方法简化了常规易错PCR诱变中的条件优化过程,简单实用.降低dATP浓度的诱变方法主要引起AT→GC的变异,适用于提高靶基因GC含量的体外诱变.本研究降低单一底物浓度的诱变方法可以提高诱变基因的AT或GC含量,是对易错PCR诱变方法的拓展.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕孟雨	河北省农林科学院遗传生理研究所河北省植物转基因中心	19	79	5.0	8.0
2	赵和	河北省农林科学院遗传生理研究所河北省植物转基因中心	29	361	12.0	18.0
3	王海波	河北省农林科学院遗传生理研究所	42	441	13.0	19.0
4	杨学举	河北农业大学农学院	94	1433	20.0	35.0
5	孙果忠	河北省农林科学院遗传生理研究所河北省植物转基因中心	8	65	6.0	8.0
6	高义平	河北省农林科学院遗传生理研究所河北省植物转基因中心	4	36	3.0	4.0