稳定表达细胞毒性T淋巴细胞相关抗原CTLA-4的293T细胞株的建立

• 作者: 刘永兰 向安 茹晓荣
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: T 淋巴细胞相关抗原-4 293T 细胞 基因克隆 真核表达
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 论 著
• 页码范围: 252-256
• 页数: 5页
• 分类号: R349.6
• 字数: 2980字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2014.05.002

摘要

目的：构建稳定表达细胞毒性 T 淋巴细胞相关抗原-4（cytotoxic T lymphocyte antigen-4， CTLA-4）的293T 细胞株。方法首先从人外周血获取 PBMC 加以 T 细胞活化； PCR 扩增 CTLA-4转录本，连接pUCm-T 质粒引入 HindⅢ和 EcoRⅠ双酶切位点后转入真核细胞表达质粒 pcDNA3．1；重组质粒 pcDNA3．1-CTLA-4经脂质体转染293T 细胞，以抗生素 G418筛选表达 CTLA-4的293T 细胞；定量 PCR、免疫荧光分别检测293T 细胞 CTLA-4表达与细胞定位。结果血样来源 T 细胞经活化后表达 CTLA-4转录本。 HindⅢ和EcoRⅠ双酶切证实重组质粒内 CTLA-4插入序列正确； RT-PCR 及免疫荧光检测证实293T 细胞能够稳定表达目的蛋白 CTLA-4，并定位于细胞膜表面。结论成功构建的 pcDNA3．1-CTLA-4重组真核表达载体，在293T 细胞膜表面实现了稳定表达，为进行相关生物学理论与应用研究打下基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	茹晓荣	西安医学院基础医学部生物化学与分子生物学教研室	12	15	3.0	3.0
2	刘永兰	第四军医大学药学系药物基因组学教研室	6	7	2.0	2.0
3	向安	第四军医大学药学系药物基因组学教研室	6	4	1.0	2.0