富含T细胞表位的肿瘤成纤维细胞激活蛋白片段克隆表达及纯化

• 作者: 李翰 杜军 梁艳清 衣艳梅 陈东
• 来源期刊: 中华肿瘤防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肿瘤 T细胞表位 成纤维细胞激活蛋白 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 前沿报道/论著
• 页码范围: 1-4
• 分类号: R730.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-5269.2014.01.001

摘要

目的:表达并纯化富含T细胞表位的肿瘤成纤维细胞激活蛋白(fibroblast activation protein,FAP)片段.方法:利用T细胞表位预测软件及酶切位点预测软件分析FAP全长,选取FAP蛋白内富含T细胞表位又缺少酶切位点的多肽AA264～AA449(NP_032012.1)作为目的表达片段.该多肽所对应的核酸片段为mRNA798～1418(GenBank:BC019190.1).利用PCR技术从含有FAP基因全长的质粒pCDNA3.1-FAP中扩增目的基因mRNA798～1418,并将该基因与原核表达载体pET-28a(+)连接,在BL21工程菌中实现重组蛋白His6-FAP264-449的表达,并利用His标签进行纯化.结果:成功构建了富含T细胞表位的FAP原核表达质粒pET-28a(+)-FAP798-1418,对该质粒进行BamH1/Xho1双酶切鉴定,鉴定结果与预期完全一致;实现了对该质粒编码的融合蛋白His6-FAP264-449的表达,表达后的融合蛋白主要以包涵体的形式存在;利用His标签纯化了该融合蛋白,纯化后灰度分析其纯度达95％.结论:成功表达并纯化了富含细胞表位的FAP片段,为下一步以FAP为靶标的肿瘤免疫治疗策略提供了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杜军	中山大学药学院微生物与生化药学实验室	61	250	7.0	12.0
2	陈东	广东医学院基础学院组织胚胎学教研室	89	447	10.0	16.0
3	衣艳梅	广东医学院基础学院组织胚胎学教研室	7	20	3.0	4.0
4	梁艳清	广东医学院基础学院组织胚胎学教研室	13	48	4.0	6.0
5	李翰	中山大学药学院微生物与生化药学实验室	1	0	0.0	0.0