山定子遗传转化体系的优化

• 作者: 张新忠 张柳霞 李白沙 王忆 韩振海
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 载体构建 绿色荧光蛋白 山定子 遗传转化
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 265-272
• 页数: 8页
• 字数: 5927字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2014.03.001

摘要

为了优化山定子(Malus baccata)遗传转化体系,利用DNA重组技术,将绿色荧光蛋白基因(GFP)克隆到植物表达载体pBI121中,得到新型的重组质粒pBI 121-eGFP.重组pBI121-eGFP质粒在根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens) EHA105介导下转化山定子.结果表明,叶片切块后振荡侵染5～8min,共培养3d,之后用含有500 mg/L Cef的MS液体清洗后转移到含有300mg/LCef的筛选培养基中,同时卡那霉素的筛选浓度由5 mg/L加大到20 mg/L时,获得的转化效率较高.对体系优化过程中获得的7株抗性苗进行了PCR检测、RT-PCR分析、绿色荧光现象观察及荧光蛋白信号分析,结果显示,其中6株抗性苗PCR检测呈阳性,3个eGFP基因表达量较高的转基因株系T1、T3和T6的绿色荧光现象较强,且具有较高的荧光蛋白信号.荧光检测与分子检测结果基本一致,从而可以利用绿色荧光直接检测转基因植株,达到优化山定子遗传转化体系的目的.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王忆	中国农业大学园艺植物研究所	57	614	14.0	22.0
2	韩振海	中国农业大学园艺植物研究所	156	3213	31.0	48.0
3	张新忠	中国农业大学园艺植物研究所	65	627	17.0	22.0
4	张柳霞	中国农业大学园艺植物研究所	2	26	2.0	2.0
5	李白沙	中国农业大学园艺植物研究所	1	3	1.0	1.0