杜氏盐藻电击转化体系的优化

• 作者: 史飞飞 季春丽 宋程飞 李润植 程蔚兰 郝敬云
• 来源期刊: 山西农业大学学报(自然科学版)
• 关键词: 杜氏盐藻 遗传转化 电击法 VgDGAT1a基因
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 专题:微藻生物技术
• 页码范围: 36-42
• 页数: 7页
• 分类号: Q949.21
• 语种: 中文
• DOI: 10.13842/j.cnki.issn1671-8151.201706012

摘要

[目的]构建盐藻高效遗传转化体系,以利于在细胞内组装靶标代谢途径,进而以盐藻为生物反应器规模化生产类胡萝卜素、生物燃油等高值产品.[方法]以杜氏盐藻(Dunaliella salina)为受体,以来源于高油植物斑鸠菊(Ver-nonia galamensis)编码DGAT酶的基因V gDGA T1a为靶基因,以pCAMBIA3301为表达载体,利用电击法进行遗传转化,优化转化条件和相关参数,并对转化体进行分子检测.[结果]杜氏盐藻对除草剂草铵膦敏感,固体和液体培养筛选阳性转化体的草铵膦浓度分别为20 mg·L -1和40 mg·L -1.优化的盐藻电转化技术条件包括:培养7 d的藻细胞为受体,质粒浓度6 mg·L -1,电击参数为0.4 kV和4 ms.盐藻转化率达2.63‰,比现有转化效率提高约1.14倍.分子检测显示靶基因V gDGA T1a基因成功转入杜氏盐藻并高效表达.[结论]建立的优化电击转化方法显著提高了盐藻转化效率,在高等植物遗传转化中,常用的抗除草剂草铵膦 Bar基因可用作盐藻基因转化的选择标记,植物表达载体pCAMBIA3301亦可用于盐藻遗传转化.