谷子茎尖体外遗传转化体系的建立与优化

• 作者: 杨澜 刘雅 项阳 孙秀娟 颜景畏 张阿英
• 来源期刊: 植物学报
• 关键词: 谷子 遗传转化 草丁膦 体外 茎尖
• 年，卷（期）: 2021,（null）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 71-79
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.11983/CBB20119

摘要

以谷子(Seteria italica)豫谷一号为实验材料，建立了一套简便、稳定的体外茎尖遗传转化体系。通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的茎尖转化法，对转化受体采取不同的处理方式，待拟转化株长到三叶期后进行PCR鉴定。探明了草丁膦(Basta)喷施处理用于谷子转基因幼苗筛选的最适浓度，以及2种不同检测方式(直接PCR和喷施Basta+PCR)鉴定转基因植株的效果。在上述基础上，对影响谷子遗传转化体系的多种因素进行优化。结果表明，菌液浓度(OD600)=1.4、侵染液中乙酰丁香酮浓度为800 μmol·L–1、侵染压强为0.05 MPa、侵染40分钟有利于谷子茎尖的遗传转化。同时，采用上述优化系统获得谷子转SiCBL4基因植株，通过喷施草丁膦和实时荧光定量PCR对T2代转基因植株进行遗传稳定性分析，可节约检测时间。综上，该研究初步建立了稳定的谷子体外茎尖遗传转化体系，并开发了一种便捷的检测后代转基因植株的组合方法。