对虾肝胰腺细小病毒滚环扩增检测方法的建立

• 作者: 刘天齐 刘笋 张庆利 杨冰 杨昊霖 王勤涛 黄倢
• 来源期刊: 渔业科学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 对虾 肝胰腺细小病毒 检测 滚环扩增
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 59-65
• 页数: 7页
• 分类号: S917
• 语种: 中文
• DOI: 10.11758/yykxjz.20140409

摘要

根据对虾肝胰腺细小病毒(HPV)保守基因序列，设计特异性的锁式探针及其扩增引物，优化反应条件，建立了肝胰腺细小病毒超分支滚环扩增检测方法。实验中采用一步法连接，探针在Taq DNA连接酶作用下，58℃连接40 min、62℃扩增30 min便可以扩增出明显条带。反应特异性验证实验表明，该体系能够特异性地检测出 HPV，而不与供试的其他对虾病原发生交叉反应；灵敏度分析结果显示该方法的检测极限为105 copies/μl，与PCR检测方法相比，一步法连接的滚环扩增的灵敏度低两个数量级。该方法反应过程中温度变化次数少，基本都在等温条件下进行，不需要PCR仪，可发展成为在简便实验条件下使用的简易检测方法。