体外L02肝细胞氧化损伤模型的构建

• 作者: 孟炜 易述红 赵辉 陈规划
• 来源期刊: 器官移植
• 学科: 医学
• 关键词: 肝细胞 氧化损伤 缺血-再灌注损伤 凋亡
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 论著 -- 实验研究
• 页码范围: 242-246,250
• 页数: 6页
• 分类号: R617
• 字数: 3884字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7445.2014.04.010

摘要

目的：探讨L02肝细胞氧化损伤模型的构建方法。方法将L02肝细胞培养后分为损伤3 h组、6 h 组和12 h 组，每组再根据加入不同浓度的过氧化氢（H2 O2）分为100、200、300、500、750、1000μmol/L 6个亚组，对照组不加入H2 O2，分别在培养箱中继续孵育3 h、6 h或12 h后进行细胞计数试剂盒（CCK）-8检测。另1组L02肝细胞培养后分为损伤3 h组、6 h组和12 h组，损伤3 h组再根据加入H2 O2浓度不同分为100、200、300、500、750μmol/L 5个亚组，损伤6 h组分为100、200、300、500μmol/L 4个亚组，损伤12 h组分为100、200、300μmol/L 3个亚组，对照组不加入H2 O2，分别在培养箱中继续孵育3 h、6 h或12 h后进行Annexin V-异硫氰酸荧光素（FITC）/碘化丙啶（PI ）双染流式细胞检测。损伤模型的建立及鉴定：L02肝细胞培养后损伤组加入200μmol/L H2 O2，对照组不加入H2 O2。在培养箱中继续孵育6 h后检测细胞线粒体膜电位、丙二醛（MDA）、活性氧自由基（ROS）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）等指标。结果损伤3 h组中，200、300、500、750、1000μmol/L等各亚组的细胞存活率与对照组比较，差异有统计学意义（均为P＜0.01）；损伤6 h组中，各亚组细胞存活率与对照组比较差异均有统计学意义（均为P＜0.01）；损伤12 h组中，各亚组存活率与对照组比较差异均有统计学意义（均为P＜0.01）。3 h H2O2浓度与细胞存活率的相关系数为-0.993，6 h组为-0.955，12 h组为-0.819。Annexin V-FITC /PI双染检测不同浓度、不同作用时间的H2 O2损伤情况下细胞凋亡/坏死率：损伤3、6、12 h组中，损伤各亚组与对照组比较，差异均有统计学意义（均为P＜0.01）。3 h组H2O2浓度与细胞凋亡或坏死率的相关系数为0.971，6 h组为0.992，12 h组为0.986。与对照组比较，200μmol/L H2 O2作用6 h 处理 L02肝细胞损伤组的线粒体膜电位、MDA、ROS、SOD、ALT、AST差异均有统计学意义（均为P＜0.01）。结论200μmol/L H2O2作用6 h处理L02肝细胞是体外模拟缺血-再灌注或氧化损伤的良好模型。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈规划	中山大学附属第三医院肝胆外科	219	1270	16.0	25.0
2	易述红	中山大学附属第三医院肝胆外科	41	104	5.0	8.0
3	赵辉	中山大学附属第三医院肝胆外科	7	15	2.0	3.0
4	孟炜	中山大学附属第三医院肝胆外科	4	18	2.0	4.0