5-氮杂-2'-脱氧胞苷通过上调法尼酯X受体启动子甲基化水平抑制HepG2细胞载脂蛋白A表达

• 作者: 何兴兰 张海 王佐 瞿凯 谭剑凯 雷建军 马小峰
• 来源期刊: 中国动脉硬化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 载脂蛋白A 脂蛋白(a) 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 DNA甲基化 法尼酯X受体
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1081-1086
• 分类号: R363
• 语种: 中文

摘要

目的 探索5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)的DNA去甲基化作用对HepG2细胞载脂蛋白A(ApoA)表达的影响,并探讨其作用机制.方法 选取ApoA高表达细胞株HepG2细胞为研究对象.噻唑蓝法测定HepG2经不同浓度(0、10、20、40、80 μmol/L)的5-Aza-CdR处理不同时间(12、24、48、72、96 h)后细胞相对存活率;Westernblot检测5-Aza-CdR不同浓度组HepG2细胞ApoA、法尼酯X受体(FXR)的表达水平;逆转录聚合酶链反应检测ApoA、FXR的mRNA水平;亚硫酸氢盐测序PCR检测FXR基因启动子在5-Aza-CR不同浓度组的甲基化水平.结果 与对照组相比,5-Aza-CR 10、20、40 μmol/L组在12、24、48、72 h各组间细胞存活率无统计学差异(P＞0.05),而在20 μmol/L 96 h组、40 μmol/L 96 h组、80 μmol/L 24 h组、80 μmol/L 48 h组、80 μmol/L 72 h组以及80μmol/L 96 h组HepG2细胞存活率存在统计学差异(P＜0.05),选取0～40 μmol/L为5-Aza-CdR的安全浓度范围,0～72 h为合适作用时间.与对照组相比,5-Aza-CdR呈剂量和时间依赖性上调FXR蛋白、下调ApoA蛋白表达,其中以40 μmol/L组最为明显(P＜0.05);与对照组相比,5-Aza-CdR呈剂量依赖性上调FXR mRNA、下调ApoA mR-NA表达,其中以40 μmol/L组最为明显(P＜0.05).随着5-Aza-CdR浓度的递增,FXR基因启动子甲基化水平呈下降趋势,其中对照组FXR基因启动子甲基化率为58.3％,而40 μmol/L组FXR基因启动子甲基化率仅为8.3％.结论 5-Aza-CdR通过DNA去甲基化作用促进FXR表达,从而下调ApoA的表达.