对虾白斑综合征病毒结构蛋白基因vp95表达时序分析及其抗体的制备

• 作者: 徐丽美 李钫 杨丰 高美玲
• 来源期刊: 厦门大学学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 对虾白斑综合征病毒 VP95 转录分析 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 页码范围: 126-131
• 页数: 6页
• 分类号: S945.1
• 字数: 4701字
• 语种: 中文
• DOI: 10.6043/j.issn.0438-0479.2014.01.025

摘要

对虾白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是造成养殖对虾病害的主要病原,其300 kb的双链环状DNA基因组共编码532个开放阅读框(open reading frames,ORF).蛋白VP95是WSSV的结构蛋白,在病毒囊膜蛋白和核衣壳中均有分布,由ORFwsv442编码,基因全长2 400 bp.首先对基因vp95的表达时序进行分析,证明该基因属于晚期基因.为了更深入地研究该结构蛋白的功能,选择中间编码200个氨基酸的片段(1 051～1 650 nt)进行克隆表达.此片段被克隆到pET-His载体上,构建好的质粒转化人表达菌株大肠杆菌(Escherichia coli)BL-21 (DE3),经IPTG诱导后,收集细菌,超声破碎后,将含有可溶性表达重组蛋白的上清用Ni2+ NTA agaros纯化.纯化的重组蛋白His-VP95-M200免疫小鼠,制备抗血清.为了去除血清中的杂质,用HiTrap NHS-activated HP (GE Healthcare)亲和层析纯化柱子纯化血清中抗蛋白VP95的抗体.Western blot分析显示,未纯化的血清和纯化的抗体对病毒粒子中蛋白VP95都有很高的效价,并且具有严格的专一性.为进一步研究VP95蛋白在病毒粒子的包装中的作用,以及其在病毒的入侵过程中的功能奠定了良好的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨丰	国家海洋局第三海洋研究所海洋生物遗传资源重点实验室	34	336	12.0	17.0
2	李钫	国家海洋局第三海洋研究所海洋生物遗传资源重点实验室	5	8	1.0	2.0
3	徐丽美	国家海洋局第三海洋研究所海洋生物遗传资源重点实验室	9	125	6.0	9.0
4	高美玲	厦门大学海洋与地球学院	1	0	0.0	0.0