对虾白斑综合征病毒囊膜蛋白VP28和VP26的毕赤酵母组成型分泌表达

• 作者: 周怡 张文兵 徐玮 王小霞 耿小雪 麦康森
• 来源期刊: 渔业科学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 白斑综合征病毒 VP28 VP26 重组表达 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 135-139
• 页数: 5页
• 分类号: S945
• 字数: 3536字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11758/yykxjz.20150522001

摘要

近年来，重组 VP28和 VP26蛋白作为蛋白亚单位疫苗，在增强对虾抗白斑综合征病毒(WSSV)感染的过程中具有重要作用。本研究根据GenBank中WSSV的基因序列设计引物，以WSSV粗提液为模板进行普通PCR扩增，得到VP28和VP26基因，再用引物悬挂法将EcoRⅠ和XbaⅠ酶切位点分别添加到 VP28和 VP26基因的5￠端和3￠端。目的基因经双酶切后插入到表达载体pGAPZαA，转化TOP10大肠杆菌，经博莱霉素(Zeocin)抗性筛选阳性重组酵母表达载体。AvrⅡ酶切线性化之后，电击转化 X-33毕赤酵母感受态细胞，经 Zeocin 抗性筛选得到阳性重组酵母。SDS-PAGE电泳分析重组酵母表达上清液的目的蛋白，没有检测到VP28和VP26重组蛋白。随后，采用蛋白质银染法，结果显示，与空载pGAPZαA组相比，VP28和VP26表达上清液组有明显的条带，证明VP28和VP26在毕赤酵母中成功表达，蛋白分子量大小约为32 kDa。