Ag85 A-CD226 DNA 疫苗的制备及对小鼠免疫功能的影响

• 作者: 吕昌龙 孙逊 朱俊丰 李岩 李胜军 杨芳莉 桑力轩 王大南
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: Ag85A CD226 DNA疫苗 免疫功能
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 疫苗学
• 页码范围: 235-240
• 页数: 6页
• 字数: 5172字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2014.03.016

摘要

目的：构建pcDNA3．1-Ag85A-CD226真核表达质粒，制备Ag85A-CD226 DNA疫苗，经灌胃接种并观察该疫苗对小鼠免疫功能的影响。方法采用PCR方法从CD226-PCR2．1-ToPo质粒扩增CD226基因，与pcDNA3．1-Ag85A质粒连接，构建pcDNA3．1-Ag85A-CD226真核表达质粒，经脂质体转染法瞬时转染HEK293细胞株，采用RT-PCR、Western blot、免疫荧光方法检测Ag85A-CD226基因在该细胞内的表达。进一步提取纯化pcDNA3．1-Ag85 A-CD226重组质粒，用脂质体包裹制成Ag85 A-CD226 DNA疫苗。经灌胃Ag85 A-CD226 DNA疫苗接种于小鼠，乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞杀伤活性，ELISA法检测脾细胞培养上清细胞因子分泌水平，real-time PCR法检测肠黏膜组织内细胞因子表达水平。结果成功构建真核细胞内表达pcDNA3．1-Ag85A-CD226重组质粒，并且转染HEK293细胞株检测到Ag85 A-CD226融合蛋白分子的表达。接种Ag85 A-CD226 DNA疫苗的小鼠较对照组小鼠NK细胞杀伤活性显著升高（ P＜0．01）；脾细胞培养上清中TNF-α、IFN-γ和IL-2的分泌水平显著增高（P＜0．01），而IL-4分泌水平显著降低（P＜0．01）；肠黏膜组织内TNF-α、IFN-γ和IL-2的表达水平显著升高（P＜0．01），而IL-4表达水平未见有统计学差异（P＞0．05）。结论 Ag85A-CD226 DNA疫苗经灌胃接种可诱导小鼠全身和肠道局部Th1型免疫应答增强，其效果强于单独应用Ag85 A或CD226 DNA疫苗。