农杆菌介导美味猕猴桃基因转化影响因素研究

• 作者: 杜晓莉 杨玉霞 覃建林 陆荣生 霍秀娟 韩美丽 马跃峰
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 美味猕猴桃 外植体 褐化 Shiva A基因 转化效率
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子生物学
• 页码范围: 551-557
• 页数: 7页
• 分类号: S663.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2014.4.551

摘要

[目的]建立美味猕猴桃叶片外植体转化体系,为猕猴桃遗传转化研究奠定良好基础.[方法]以美味猕猴桃组培苗叶片为材料,研究不同浓度乙酰香酮(AS)对外植体β-葡萄糖苷酸酶基因(GUS)瞬时表达阳性率的影响,及暗培养时间与抗褐化剂二硫苏糖醇(DTT)、聚乙烯呲咯烷酮(PVP)对外植体褐化、抗性芽诱导的影响.[结果]仅在侵染菌液中添加AS时,100、150、200 μmol/L AS 3个处理的外植体GUS阳性率均极显著高于对照,分别为14.6％、16.7％、10.7％;而当农杆菌侵染液与共培养基中同时添加100～150μmol/L AS,可使GUS瞬时表达阳性率提高至37.9％.选择培养初期经过2～12 d暗培养后,外植体褐化率不断下降,抗性芽诱导率不同程度提高,其中以暗培养6、8d处理的褐化率相对较低,分别为33.2％和30.6％,且相应的抗性芽诱导率最高,分别为14.2％和13.1％,极显著高于其他处理与对照.在分化培养基中添加1.0～2.0 g/L的DTT并暗培养6d的效果优于对应浓度的PVP;其中1.5 g/L DTT并暗培养6d,可使外植体褐化率降至13.4％,卡那霉素抗性芽诱导率提高至24.3％.卡那霉素抗性植株叶片GUS染色与PCR扩增结果显示,ShivaA基因已转化至美味猕猴桃秦美.[结论]AS不同使用方式及其浓度对叶片GUS瞬时阳性表达率的提高具有明显影响;选择培养初期进行暗培养6～8 d或暗培养结合添加1.0～2.0 g/L DTT抗褐化剂,均可降低美味猕猴桃叶片转化芽再生过程中的褐化,提高转化效率.