紫杉醇对人Tenon囊成纤维细胞增生的抑制作用及机制

• 作者: 杜然然 毕宏生 郭大东 郭媛媛 陈宁虹 马晓华
• 来源期刊: 中华实验眼科杂志
• 关键词: 紫杉醇/药理学 青光眼/手术 Tenon囊/细胞学 成纤维细胞/细胞学 基质金属蛋白酶-1
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 119-124
• 页数: 6页
• 字数: 6096字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.2096-1060.2014.02.005

摘要

背景 人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)的异常增生是导致抗青光眼滤过手术失败的主要原因.寻找抑制HTFs增生的药物对抑制青光眼术后功能性滤过泡的瘢痕化有重要意义. 目的 观察紫杉醇对体外培养的HTFs增生、凋亡、细胞周期以及基质金属蛋白酶-1(MMP-1)表达的影响.方法 收集抗青光眼滤过术中切除的人眼Tenon囊组织,用组织块培养法培养HTFs并进行传代,取3～6代细胞用于实验.采用小鼠抗人角蛋白抗体、小鼠抗人波形蛋白抗体、小鼠抗人结蛋白抗体、小鼠抗人S-100抗体行免疫组织化学染色鉴定培养的HTFs.在培养基中分别加入0、1×10-8、1 × 10-7、1 × 10-6 mol/L紫杉醇,采用实时细胞电子分析系统(RT-CES)观察不同浓度紫杉醇作用后HTFs的细胞指数变化；采用DAPI染色法观察各组细胞的凋亡情况；用流式细胞术检测不同浓度紫杉醇作用后HTFs各细胞周期比例；采用实时定量PCR(real-time PCR)和ELISA法检测各组HTFs中MMP-1 mRNA和蛋白的表达量,分别以MMP-1 mRNA/GAPDH mRNA和MMP-1蛋白质量浓度(μg/L)表示.结果 组织块原代培养7d内可见细胞游出,呈长梭形和不规则三角形,培养的细胞抗波形蛋白抗体染色阳性,而抗角蛋白抗体、抗结蛋白抗体和抗S-100抗体染色阴性.培养基中加入紫杉醇作用24 h后,1×10-8、1×10-7、1×10-6 mol/L紫杉醇组平均细胞指数值分别为1.093±0.191、0.665±0.093和0.473±0.117,均明显低于0 mol/L紫杉醇组的1.514±0.283,差异均有统计学意义(均P=0.000)；紫杉醇作用后,HTFs的细胞核内可见呈DAPI蓝色荧光的颗粒状物质,荧光强度随着紫杉醇浓度的增加而增强.1×10-8、1×10-7、1×10-6 moL/L紫杉醇分别作用12h后,G2/M期HTFs的比例分别为(9.20±0.80)％、(12.37±0.45)％和(13.80±0.35)％,明显高于0 mol/L紫杉醇组的(7.17±0.50)％,差异均有统计学意义(P=0.005、0.000、0.000).与0 mol/L紫杉醇组比较,1×10-8、1 ×10-7、1 ×10-6 mol/L紫杉醇作用30 min后HTFs中MMP-1mRNA的相对表达量均明显下降,差异均有统计学意义(均P=0.000)；1×10-8、1×10.、1×106mol/L紫杉醇作用24 h后,HTFs中MMP-1蛋白的表达量均明显低于0 mol/L紫杉醇组,差异均有统计学意义(P=0.010、0.002、0.001).结论 1×10-8 ～ 1×10-6 mol/L紫杉醇可抑制体外培养HTFs的增生,诱导细胞凋亡,阻断细胞的有丝分裂,其作用机制可能与下调细胞中MMP-1的表达有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	毕宏生		162	541	10.0	12.0
2	马晓华		15	64	5.0	7.0
3	郭大东	山东中医药大学眼科研究所	37	165	7.0	10.0
4	杜然然	山东中医药大学眼科研究所	5	20	2.0	4.0
5	郭媛媛		4	11	2.0	3.0
6	陈宁虹		3	8	2.0	2.0