人源性抗乳腺癌HER2噬菌体单链抗体库的构建与筛选

• 作者: 卢晓辉 朱丽华 杨清玲 王志文 蔡颖 陈昌杰 黄静
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 乳腺肿瘤/免疫学 DNA,互补/遗传学 基因文库 抗体,细菌/遗传学 细菌噬菌体/遗传学 受体,erbB-2 受体,CXCR4 聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 专题报道
• 页码范围: 434-440
• 页数: 7页
• 分类号: R737.9
• 字数: 4374字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2014.07.006

摘要

目的:构建人源性抗乳腺癌噬菌体单链抗体(scFv)库,筛选和鉴定抗乳腺癌人类表皮生长因子受体2(HER2)特异性scFv,为HER2和CXC趋化因子受体4 (CXCR4)双靶向融合蛋白的研制提供靶向HER2的高亲和力序列.方法:取已确诊的乳腺癌患者癌旁淋巴组织,提取总RNA;构建可变区基因的T载体库,将重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因与pCANTAB连接肽连接,获得pCANTAB-scFv,电转化感受态大肠杆菌TG1;以M13K07辅助噬菌体进行感染,获噬菌体抗体库;利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测筛选后获得的噬菌体抗体活性,以免疫组织化学法检测抗体亲和力,并通过测序进一步鉴定.结果:成功构建大容量pCANTAB-scFv抗体库,获得的scFv长度为750 bp,VH和VL长度分别为375和330 kb;电转化大肠杆菌TG1后酶切验证插入片段大小正确,得到库容为2.48×108的大容量抗体库;通过噬菌体展示和淘洗筛选,富集针对乳腺癌细胞株SKBR-3表面抗原的抗体库;所得抗体对HER2有高度的亲和力和特异性,对乳腺癌组织HER2抗原也具有较高的亲和力;测序结果与人IgG抗体进行对比,所获得的scFv具有高度的人源性.结论:主要构建了大容量人源性抗乳腺癌细胞的噬菌体scFv库,并筛选获得可特异性识别人乳腺癌HER2的高亲和力scFv,为制备以HER2为靶点的抗肿瘤HER2和CXCR4双靶向融合蛋白提供了载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨清玲	蚌埠医学院生物化学与分子生物学教研室	76	343	9.0	14.0
2	蔡颖	蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心	4	20	2.0	4.0
3	黄静	蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心	7	63	4.0	7.0
4	卢晓辉	蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心	3	3	1.0	1.0
5	朱丽华	蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心	3	3	1.0	1.0
6	王志文	蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心	2	9	2.0	2.0